【答案】应助回帖

11楼2012-05-28 12:42:34

yglky

金虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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小丹木木: 金币+3, 鼓励应助，欢迎交流 2012-05-28 15:57:59

1.又是个没人指导、自学成才的研究生；（希望导师能真正起到引导作用，严把实验过程质量关，而不是只收获数据，否则做出来的结果怎么可信，更谈不到创新了）
2.PCR虽然说起来很简单，有时候简单的一次操作就出现结果。但是PCR又是一个很严谨的实验操作，一个简单的污染可能就导致你的实验体系报废，出现假阳性结果，还是需要认真操作；
3.国内引物合成的时候虽然给报告单，但是每管合成引物的实际OD值绝大多数情况与报告单不符，当然误差也不是很大；但是也有少数情况下误差很大，建议在配置引物时亲自检测OD值，根据实测结果稀释引物，确保实验条件具备可重复性和可信度；

12楼2012-05-28 12:51:28

靳豆豆

金虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-05-29 13:51:17

这个，我最开始PCR的时候也遇到过，后来什么模板、退火梯度设置都尝试验证过了，还是不行。最后的最后发现是师姐给的模板序列不对（原始序列，但PCR真正的模板是大肠优化过的序列），直接导致3’端引物不能喝模板正确结合导致的。这个真有可能的，建议实在不行，楼主回源头检查一下吧~

Thereisnowaytohappiness,happinessistheway~~

13楼2012-05-29 09:01:37

tingspdf

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你给的体积没有意义，你测定了模板的浓度吗？有260/230、260/280数据吗？体系里的引物浓度和Mg2+浓度是多少？扩增条件是什么？

14楼2012-05-30 10:32:28

一杯清茶puma

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引用回帖:

12楼: Originally posted by yglky at 2012-05-28 12:51:28
1.又是个没人指导、自学成才的研究生；（希望导师能真正起到引导作用，严把实验过程质量关，而不是只收获数据，否则做出来的结果怎么可信，更谈不到创新了）
2.PCR虽然说起来很简单，有时候简单的一次操作就出现结 ...

呵呵，太理解我了你。我这是做本科毕业论文呢，能改的条件都改了，引物也是重新稀释了的，酶也换了，还是出不来啊结果啊，快愁死了，老师一直催，我都不知道该怎么办了。。。。

15楼2012-05-30 22:57:45

411一哥

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【答案】应助回帖

如果引物没有问题，那么可能的原因：1DNA放的时间太长，被降解。2跑胶电压我们一般110 电泳过程产热可能导致PCR产物降解。 3电泳槽TE缓冲液用的次数太多。

16楼2014-04-02 16:29:22