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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR好多次了，一直没结果，麻烦各位帮我看看是哪出问题了？
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一杯清茶puma

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yinchu1990 at 2012-05-28 08:58:52
可以用百分之1的胶 引物浓度是多少呢

引物是10pml的。。。
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11楼2012-05-28 12:42:34
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yglky

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助，欢迎交流 2012-05-28 15:57:59
1.又是个没人指导、自学成才的研究生；（希望导师能真正起到引导作用，严把实验过程质量关，而不是只收获数据，否则做出来的结果怎么可信，更谈不到创新了）
2.PCR虽然说起来很简单，有时候简单的一次操作就出现结果。但是PCR又是一个很严谨的实验操作，一个简单的污染可能就导致你的实验体系报废，出现假阳性结果，还是需要认真操作；
3.国内引物合成的时候虽然给报告单，但是每管合成引物的实际OD值绝大多数情况与报告单不符，当然误差也不是很大；但是也有少数情况下误差很大，建议在配置引物时亲自检测OD值，根据实测结果稀释引物，确保实验条件具备可重复性和可信度；
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12楼2012-05-28 12:51:28
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靳豆豆

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-05-29 13:51:17
这个，我最开始PCR的时候也遇到过，后来什么模板、退火梯度设置都尝试验证过了，还是不行。最后的最后发现是师姐给的模板序列不对（原始序列，但PCR真正的模板是大肠优化过的序列），直接导致3’端引物不能喝模板正确结合导致的。这个真有可能的，建议实在不行，楼主回源头检查一下吧~
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Thereisnowaytohappiness,happinessistheway~~
13楼2012-05-29 09:01:37
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tingspdf

至尊木虫 (著名写手)
你给的体积没有意义，你测定了模板的浓度吗？有260/230、260/280数据吗？体系里的引物浓度和Mg2+浓度是多少？扩增条件是什么？
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14楼2012-05-30 10:32:28
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一杯清茶puma

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by yglky at 2012-05-28 12:51:28
1.又是个没人指导、自学成才的研究生；（希望导师能真正起到引导作用，严把实验过程质量关，而不是只收获数据，否则做出来的结果怎么可信，更谈不到创新了）
2.PCR虽然说起来很简单，有时候简单的一次操作就出现结 ...

呵呵，太理解我了你。我这是做本科毕业论文呢，能改的条件都改了，引物也是重新稀释了的，酶也换了，还是出不来啊结果啊，快愁死了，老师一直催，我都不知道该怎么办了。。。。
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15楼2012-05-30 22:57:45
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411一哥

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

如果引物没有问题，那么可能的原因：1DNA放的时间太长，被降解 。2跑胶电压我们一般110 电泳过程产热可能导致PCR产物降解。 3电泳槽TE缓冲液用的次数太多。
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16楼2014-04-02 16:29:22
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