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bio830805

银虫 (小有名气)

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[交流] 电泳图谱咋这个样子，求助啊！

发觉自己的DNA电泳谱图老是很分得不好，有时候有很严重的拖尾现象。上次看到楼上实验室的师姐做得就非常清晰，每个band都分得很开，而且没有拖尾。我一般做电泳的条件是：
1.电压为80mV，
2.电泳时间一般为25－30min
3.一般吸取5ul待测DNA悬液，加到1ul loading buffer上混匀，然后加入well.
感觉条带总是不好，用的是Bio-rad的凝胶成像仪。
我最近做的一张图谱再附件里。

想请问各位前辈：
1.电泳电压对band的清晰度和分辨率影响有多大？
2.loading buffer的加量要遵守什么哪些条件，是不是有比例的？
3.怎么才能让电泳图看上去好些呢？

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不会跳舞的外语达人不是好生物学家

1楼 2007-04-21 10:12:57

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randomqd

木虫 (小有名气)

樱花骑士

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专业: 生物大分子结构与功能

平时我都是用65V跑的

最高我也只是70V,咱其它的没有,只有时间...

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未来天空才是极限

9楼2007-04-22 00:52:41

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asr

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★
dfggc(金币+1):多谢交流

4.10-4.12
泳道
名称
1
Mark
2
Quantitive mark
3
DNA (diluted 12-fold)
4
DNA (diluted 11-fold)
5
Mark
6
PCR product 1
7
PCR product 2

PCR process:
94℃ for 4 min
94℃ for 1 min
52℃ for 45s
72℃ for 2 min
Go to 2 for 29 times
72℃ for 10 min
4℃ for ever

1 7

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思想极度邪恶，勿怕勿怪！\(^o^)/~

2楼2007-04-21 11:12:49

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