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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 电泳图谱咋这个样子，求助啊！
汕头大学海洋科学接受调剂
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bio830805

银虫 (小有名气)

[交流] 电泳图谱咋这个样子，求助啊！

发觉自己的DNA电泳谱图老是很分得不好，有时候有很严重的拖尾现象。上次看到楼上实验室的师姐做得就非常清晰，每个band都分得很开，而且没有拖尾。我一般做电泳的条件是：
1.电压为80mV，
2.电泳时间一般为25－30min
3.一般吸取5ul待测DNA悬液，加到1ul loading buffer上混匀，然后加入well.
感觉条带总是不好，用的是Bio-rad的凝胶成像仪。
我最近做的一张图谱再附件里。

想请问各位前辈：
1.电泳电压对band的清晰度和分辨率影响有多大？
2.loading buffer的加量要遵守什么哪些条件，是不是有比例的？
3.怎么才能让电泳图看上去好些呢？
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1楼 2007-04-21 10:12:57
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轻5飞扬

金虫 (正式写手)
★
asr(金币+1):Thanks!
个人感觉是胶做的有问题,楼主用多大浓度的胶呀?你还是确定一下5V/cm的好
不过好像有时和你用的agarose有关,你们用的什么样的,是国产的么,我记得有一种很老式的,超难用,呵呵,所以用适当的试剂也有关

[ Last edited by 轻5飞扬 on 2007-4-21 at 20:31 ]
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8楼2007-04-21 20:29:09
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asr

荣誉版主 (知名作家)
★
dfggc(金币+1):多谢交流
4.10-4.12
泳道
名称
1
Mark
2
Quantitive mark
3
DNA (diluted 12-fold)
4
DNA (diluted 11-fold)
5
Mark
6
PCR product 1
7
PCR product 2

PCR process:
94℃ for 4 min
94℃ for 1 min
52℃ for 45s
72℃ for 2 min
Go to 2 for 29 times
72℃ for 10 min
4℃ for ever

1                 7
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思想极度邪恶，勿怕勿怪！\(^o^)/~
2楼2007-04-21 11:12:49
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Doublel

铁虫 (小有名气)
★
dfggc(金币+1):多谢交流
电泳时电压过高会导致电流强度增加，而电流的热效应是和电流的平方成正比的，电流强度过高会直接导致凝胶发热。凝胶发热使DNA分子热运动加剧，扩散速度加快，从而导致条带不清晰。
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3楼2007-04-21 11:15:28
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lys6827

木虫 (著名写手)
★
dfggc(金币+1):多谢交流
如果你做PCR产物检测，建议取2ul的产物与2ul的loading buffer混合后点于1%胶以120伏电压电泳。如果是总DNA检测取1ul与2ulloading混合，胶用0.5%到1%以50伏电压电泳。回收胶则用2%，电压50-100伏，将3ul的loading 加到所用产物中混合后上样。
赞一下(5人) 回复此楼
4楼2007-04-21 11:55:08
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