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bio830805

银虫 (小有名气)

[交流] 电泳图谱咋这个样子,求助啊!

发觉自己的DNA电泳谱图老是很分得不好,有时候有很严重的拖尾现象。上次看到楼上实验室的师姐做得就非常清晰,每个band都分得很开,而且没有拖尾。我一般做电泳的条件是:
1.电压为80mV,
2.电泳时间一般为25-30min
3.一般吸取5ul待测DNA悬液,加到1ul loading buffer上混匀,然后加入well.
感觉条带总是不好,用的是Bio-rad的凝胶成像仪。
我最近做的一张图谱再附件里。

想请问各位前辈:
1.电泳电压对band的清晰度和分辨率影响有多大?
2.loading buffer的加量要遵守什么哪些条件,是不是有比例的?
3.怎么才能让电泳图看上去好些呢?
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不会跳舞的外语达人不是好生物学家
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bio830805

银虫 (小有名气)

太感谢大家了,向前辈们致敬!
不会跳舞的外语达人不是好生物学家
10楼2007-04-22 17:22:58
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查看全部 10 个回答

asr

荣誉版主 (知名作家)


dfggc(金币+1):多谢交流
4.10-4.12
泳道
名称
1
Mark
2
Quantitive mark
3
DNA (diluted 12-fold)
4
DNA (diluted 11-fold)
5
Mark
6
PCR product 1
7
PCR product 2

PCR process:
94℃ for 4 min
94℃ for 1 min
52℃ for 45s
72℃ for 2 min
Go to 2 for 29 times
72℃ for 10 min
4℃ for ever

1                 7
思想极度邪恶,勿怕勿怪!\(^o^)/~
2楼2007-04-21 11:12:49
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Doublel

铁虫 (小有名气)


dfggc(金币+1):多谢交流
电泳时电压过高会导致电流强度增加,而电流的热效应是和电流的平方成正比的,电流强度过高会直接导致凝胶发热。凝胶发热使DNA分子热运动加剧,扩散速度加快,从而导致条带不清晰。
3楼2007-04-21 11:15:28
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lys6827

木虫 (著名写手)


dfggc(金币+1):多谢交流
如果你做PCR产物检测,建议取2ul的产物与2ul的loading buffer混合后点于1%胶以120伏电压电泳。如果是总DNA检测取1ul与2ulloading混合,胶用0.5%到1%以50伏电压电泳。回收胶则用2%,电压50-100伏,将3ul的loading 加到所用产物中混合后上样。
4楼2007-04-21 11:55:08
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