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padodo

至尊木虫 (职业作家)

胖嘟嘟

优秀版主

[求助] 请教如何判断aptamer是否有效?

大家好,我最近做一个关于aptamer的实验,是用纳米粒子对荧光修饰的aptamer的荧光淬灭,然后在分析物存在下荧光回复。
但是试验中,增加分析物浓度也始终不能使荧光回复,不知道问题所在。我怀疑是我的aptamer有问题,不知道大家有没有什么好方法验证到手的FAM-aptamer的序列正确性 ?
我的aptamer是上海生工合成的。
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
padodo: 金币+7, ★★★很有帮助, 很高很高的建议! 2012-05-23 21:39:12
padodo: 回帖置顶 2012-05-23 21:39:58
你换种方式,先让aptamer与分析物结合,再加纳米颗粒。
低调务实!
11楼2012-05-23 20:29:19
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普通回帖

sally208

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
padodo: 金币+10, ★★★很有帮助, 呵呵,你要是在国内,我就一个电话打过来问你了^.^ 2012-05-23 08:56:08
有否可能aptamer与分析物结合后仍吸附在纳米粒子表面,这样的话荧光没有恢复就能理解了。
此外,我没理解错的话,你这个sensor的设计前提在于aptamer能吸附在纳米粒子表面,从而导致荧光淬灭,对此有否实验证明?如果不是static quenching, 而是碰撞引起的dynamic quenching,嘿嘿,你也得考虑一下了。
2楼2012-05-23 05:04:50
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
padodo: 金币+3, ★有帮助, 谢谢! 2012-05-23 08:56:20
适配子与分析物结合后,可能还吸附在粒子表面。
蓝精灵
3楼2012-05-23 06:36:30
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padodo

至尊木虫 (职业作家)

胖嘟嘟

优秀版主

引用回帖:
2楼: Originally posted by sally208 at 2012-05-23 05:04:50:
有否可能aptamer与分析物结合后仍吸附在纳米粒子表面,这样的话荧光没有恢复就能理解了。
此外,我没理解错的话,你这个sensor的设计前提在于aptamer能吸附在纳米粒子表面,从而导致荧光淬灭,对此有否实验证明?如

sally兄,你说的这个情况我也是考虑着,如果是你那种荧光内滤导致的淬灭,那就不会有荧光恢复了。
问题在于我只是重复了一个文献(JACS)的实验,但是做不出他的现象。。。
我有什么能帮助您的吗?
4楼2012-05-23 08:52:49
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padodo

至尊木虫 (职业作家)

胖嘟嘟

优秀版主

引用回帖:
3楼: Originally posted by mlanqiang at 2012-05-23 06:36:30:
适配子与分析物结合后,可能还吸附在粒子表面。

有可能,如果是这样的话那还有什么改进的方案呢?
我有什么能帮助您的吗?
5楼2012-05-23 08:53:21
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xugehui

铁杆木虫 (著名写手)

general

引用回帖:
4楼: Originally posted by padodo at 2012-05-23 08:52:49:
sally兄,你说的这个情况我也是考虑着,如果是你那种荧光内滤导致的淬灭,那就不会有荧光恢复了。
问题在于我只是重复了一个文献(JACS)的实验,但是做不出他的现象。。。

个人感觉很多实验是重复不来的,我看文献的时候,每次看到aptamer吸附到石墨烯上面,然后加入什么物质去吸附的文章,我就心里打鼓,这个去吸附个人感觉还蛮不容易的吧。但是aptamer一般不容易失活的,楼主在重新考虑一下其他可能因素。
宇智波-鼬~美到极致是疯狂~
6楼2012-05-23 11:00:58
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padodo

至尊木虫 (职业作家)

胖嘟嘟

优秀版主

引用回帖:
6楼: Originally posted by xugehui at 2012-05-23 11:00:58:
个人感觉很多实验是重复不来的,我看文献的时候,每次看到aptamer吸附到石墨烯上面,然后加入什么物质去吸附的文章,我就心里打鼓,这个去吸附个人感觉还蛮不容易的吧。但是aptamer一般不容易失活的,楼主在重新考

谢谢!我也觉得这个竞争力可能不够,很难下来,但是人家发了JACS至少现象应该还是存在的吧。。。
我有什么能帮助您的吗?
7楼2012-05-23 12:01:03
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xugehui

铁杆木虫 (著名写手)

general

引用回帖:
7楼: Originally posted by padodo at 2012-05-23 12:01:03:
谢谢!我也觉得这个竞争力可能不够,很难下来,但是人家发了JACS至少现象应该还是存在的吧。。。

姑且相信他们的实验结果~~~
宇智波-鼬~美到极致是疯狂~
8楼2012-05-23 12:23:31
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sally208

专家顾问 (著名写手)

Anyway, good luck!
9楼2012-05-23 13:50:24
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padodo

至尊木虫 (职业作家)

胖嘟嘟

优秀版主

引用回帖:
9楼: Originally posted by sally208 at 2012-05-23 13:50:24:
Anyway, good luck!

呵呵,谢谢!
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10楼2012-05-23 14:56:10
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