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匿名

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1楼 2012-05-21 21:03:52

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凌波丽

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专业: 生物大分子结构与功能
管辖: 生物科学综合

另一个Protocol:
1.粉碎大肠杆菌，立新收集包涵体，加入0.01mmol/L PMSF（新鲜配制），50mmol/L(pH=8.0), 1mmol/L EDTA， 1mmol/LNaCl, 8mol/L,配成溶液，室温作用约1小时，过程中可用手轻轻摇匀，一般不用上摇床。
2.加入上述溶液的9倍体积的 50 mmol/L KH2PO4(pH=10)，1mmol/L EDTA，50 mmol/LNaCl, 室温约30-40分钟。第二步用NaOH将反应体系的pH调至10，配置缓冲溶液时即做到，如不行再做后调整。
3.用HCl 将溶液的pH调至约8.0，室温30分钟。
4.在4摄氏度下，10000-13000rpm 离心 15分钟或稍长时间，收集上清液和沉淀。
5.将上清液和沉淀于SDS-PAGE上样缓冲溶液混合，100 摄氏度煮沸5-10分钟，SDS-PAGE 电泳分析，观察溶解效果。

以上流程可以根据实际操作，适当修改，也用6mol/L盐酸胍对包涵体进行溶解，电泳前用透析或超滤去除掉盐酸胍。

我不说出来实验流程，我就没有做过。。。那某人出生前，地球存在吗！？