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ITS1和ITS4做样品体系中真菌菌株鉴定，为啥PCR产物竟然是2个条带？
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RT，对土壤样品中的真菌菌株鉴定，除了已知某菌株PCR为单一明亮条带外，其他土壤样品的DNA提取物用ITS1和ITS4这对引物扩增在500-700bp大都有2个目标条带。。。。什么情况？ 这样的PCR产物能够拿去克隆测序吗？ 将500-700bp的两个条带都切胶回收，可以克隆测序吗？请高手指点。 |
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12楼2013-12-06 12:14:57
qyunpeng
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【答案】应助回帖
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在雨中: 回帖置顶 2012-05-22 09:50:30
在雨中: 金币+100, ★★★★★最佳答案, 谢谢。您是高手哇 2012-05-22 09:50:42
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在雨中: 回帖置顶 2012-05-22 09:50:30
在雨中: 金币+100, ★★★★★最佳答案, 谢谢。您是高手哇 2012-05-22 09:50:42
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1.不同真菌的ITS片段大小是不一样的，大小在500-750bp之间，个别在1000左右 2.土壤样品的DNA提取物用ITS1和ITS4这对引物扩增在500-750bp大都有2个目标条带是正常的，因为土壤中的真菌种类很多，所以条带会多，而且普通电泳无法区分，所以用切胶回收做克隆测序的话，也会得到很多真菌，而不是单一的，我觉得做克隆测序是可以的 |
2楼2012-05-21 19:09:13
3楼2012-06-12 14:55:17
muchong5577
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4楼2012-06-12 17:33:26