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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » ITS1和ITS4做样品体系中真菌菌株鉴定，为啥PCR产物竟然是2个条带？
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在雨中

金虫 (著名写手)

[求助] ITS1和ITS4做样品体系中真菌菌株鉴定，为啥PCR产物竟然是2个条带？

RT，对土壤样品中的真菌菌株鉴定，除了已知某菌株PCR为单一明亮条带外，其他土壤样品的DNA提取物用ITS1和ITS4这对引物扩增在500-700bp大都有2个目标条带。。。。什么情况？
这样的PCR产物能够拿去克隆测序吗？
将500-700bp的两个条带都切胶回收，可以克隆测序吗？请高手指点。
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1楼 2012-05-21 16:15:02
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哈皮果果

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by kerrylee_tw at 2013-06-12 17:11:01
楼上同学，提个小建议，做内生的话一定要确定你的引物不会扩增出植物基因组或是线粒体或是叶绿体基因，切记切记...

你好，我是做真菌侵染植物根部实验，想送感染真菌的植物根部所提的RNA去测序，不知道这样可不科学？能否用试剂盒同时提出菌和根的RNA呢？谢谢
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你好明天
11楼2013-12-03 10:50:04
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qyunpeng

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感谢参与，应助指数 +1
在雨中: 回帖置顶 2012-05-22 09:50:30
在雨中: 金币+100, ★★★★★最佳答案, 谢谢。您是高手哇 2012-05-22 09:50:42
1.不同真菌的ITS片段大小是不一样的，大小在500-750bp之间，个别在1000左右
2.土壤样品的DNA提取物用ITS1和ITS4这对引物扩增在500-750bp大都有2个目标条带是正常的，因为土壤中的真菌种类很多，所以条带会多，而且普通电泳无法区分，所以用切胶回收做克隆测序的话，也会得到很多真菌，而不是单一的，我觉得做克隆测序是可以的
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2楼2012-05-21 19:09:13
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霸_霸

新虫 (初入文坛)
我也做真菌这个区扩增，有时候因为菌不纯会得到两个不同片段，大多还是一个条带，
还有就是 我想请问你个问题，我在pcr过程中对于某些真菌有时会p不出来，可能是dna提取的问题，你遇到过吗？
你dna是怎么提的？
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3楼2012-06-12 14:55:17
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muchong5577

金虫 (正式写手)
能多和你们交流吗？我最近也在做这个。
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4楼2012-06-12 17:33:26
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