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如何摸索液相色谱条件
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【答案】应助回帖
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mouse103: 金币+5, 谢谢分享 2012-05-21 15:03:46
rkr0427: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-05-21 19:29:28
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rkr0427: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-05-21 19:29:28
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1、如果能有相关的文献或资料参考，估计会相对比较简单。 2、条件摸索 a、样品性质 主要了解化合物的结构、分子量、pKa、UV、样品浓度范围、溶解度等。 b、色谱柱选择 样品能溶于水-有机混合液的大多数样品（特别是中性或非离子化合物），可以选择反相HPLC，流动相选择水-有机溶剂，色谱柱可以选择C18、C8、TMS、苯基、氰基。一般C18用得比较多。 样品为离子或可电离的化合物（特别是碱性或阳离子样品），可以选择离子对HPLC，流动相选择水-有机溶剂，控制pH的缓冲液和离子对试剂，色谱柱可选择C18、C8、氰基。一般C18用得比较多。 若反相或离子对HPLC无效时，或样品不溶于水-有机混合液。可以选择正相HPLC体系。流动相选择有机溶剂混合液，色谱柱选择氰基、氨基、硅胶、二醇基。 c、初始分离条件（相对较好的首要选择、等度） 色谱柱：150X4.6mm、5um、固定相为C18或C8 流动相：缓冲液-乙腈，缓冲液可选择纯水或缓冲盐（浓度10~30mM）（若中性样品，无需使用缓冲盐）并用酸碱调控pH（如果pH小于2.5，建议选择pH稳定的色谱柱，避免固定相流失），乙腈起始比例可以选择80~100%。 离子对等添加剂，开始时请不要使用。流速1.0~2.0ml/min，柱温35~40℃。 样品：（最好以流动相溶解样品）进样体积小于25uL，进样量小于100ug。 d、液相方法基本目标 分离度：R大于1.5 分离时间：5~10min较理想 定量：RSD小于2% 压力：基本要求小于200bar（20M） 针对基本目标，按实际情况进行调整，譬如流动相实际组分比例，缓冲盐浓度及pH，柱温，梯度等。 |
4楼2012-05-21 14:42:14
ltxin2009
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5楼2012-05-21 15:20:36
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