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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蓝白斑筛选只长白斑
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zqx128

金虫 (正式写手)
蓝白筛选没有蓝斑也是正常情况，比如你连接的时候载体较少，全部都插入目的片段了。菌落PCR没有批出目的带也不能说明就没有连接转化成功，或许只是PCR条件不合适没有检测出来吧，比如菌落PCR的预变性时间要适当延长。你的目的片段3kb是比较大了，建议菌落PCR检测的时候另外用一对引物，在你目的片段中能扩出500-600bp或者1000bp左右就够了。
另外，你提质粒看大小也是不准确的，因为质粒跑的快慢除了跟大小有关还跟它的状态有关，比如超螺旋型的比线性的跑的快。
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11楼2012-07-18 11:53:52
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