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pzyzj

新虫 (初入文坛)

[求助] trizol法手提虾肠道RNA电泳图,求分析

手提法提的虾肠道总RNA,测浓度之后有1700ng/ul ,但是跑电泳结果不好,很亮的拖尾不知道是什么东西,marker是100bp的,求分析
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石头宝贝

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
每次跑RNA胶都要换buffer,还有就是要放在冰上跑。电压高点,时间短点。看你的图上有很多条带,是不是降解了?可以提取的过程中加抑制剂,还有,你的marker跑的也不是很开,很清晰,检查下你胶的浓度和电泳buffer
11楼2012-05-21 16:41:43
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查看全部 13 个回答

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+3, Good! 2012-05-20 18:39:13
嗯.......................
       1. 不明白为什么大家都不怎么喜欢测OD 正常流程均是OD完再电泳 若OD时观察230 280 320与260比值确定是否有杂质再电泳会比较好
       2. 有这么种说法 RNA电泳 条带上Smear一般是gDNA污染 条带下Smear一般会是降解造成的 你这个下方过亮且第一条带和过亮区域之间有等长的三条带(第二样品比较清楚)这种亮度都可能不算Smear了 观察marker也并不是你曝光问题
       3. 电泳前有没有好好处理槽子 制胶器?有没有预跑胶?
       个人看法 可能是杂质影响 或者你这个本身大部分电泳条带就不是RNA的
       若有说错请高手指点
Let God do with it as He wills
2楼2012-05-18 22:55:17
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ncaty

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可否告知一下跑电泳时稀释的倍数?
看起来很多杂质, 一般我们跑RNA电泳之前都会换新的电泳液的.
3楼2012-05-18 23:04:53
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pzyzj

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-05-18 22:55:17:
嗯.......................
       1. 不明白为什么大家都不怎么喜欢测OD 正常流程均是OD完再电泳 若OD时观察230 280 320与260比值确定是否有杂质再电泳会比较好
       2. 有这么种说法 RNA电泳 条带上Smear一 ...

260/280大概是2.0,OD是电泳之前测的,开始以为是浓度太高了才会拖尾那么严重,但稀释10倍之后去跑电泳还是这样,那么亮的拖尾是不是蛋白质之类的残留很多啊?  手提法应该怎样才能提的纯一些?
4楼2012-05-19 14:57:30
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