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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取动物组织RNA时的处理
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ljapril

新虫 (初入文坛)

[求助] 提取动物组织RNA时的处理

我要从小鼠脑部的海马提取RNA，现在组织已经有了，放在1.5ml的EP管中，只有一点点，提取RNA时需要充分研磨破碎，我们这里只有细胞超生破碎仪，那么我这种情况可以用吗?
一是超生破碎放热，会影响RNA吗？
二是探头该怎么处理啊？用DEPC水冲洗？会不会很容易污染样品？
三是大概要破碎多久呢？设定的参数最好是多少啊？怎么判断破碎充分了呢？
问题有点多，谢谢大家了！
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1楼 2012-05-16 22:46:26
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wmjqy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-29 13:46:46
ljapril: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-07-19 10:24:46
像你这种脑组织的话很容易研磨的。我做了大鼠的十一个组织，其中大脑就是最容易的。每次我们约取0.1g或更少在玻璃匀浆器里面进行研磨。像肌肉这种很难磨得组织看，都能充分磨碎。建议冰上玻璃匀浆器。液氮研磨极易挥发，研磨效果不好，且耗费高，操作不方便
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13楼2012-05-28 23:55:07
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karin

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-17 14:45:14
ljapril: 金币+1 2012-07-19 10:25:21
没有用超声破碎过动物组织，破碎过大肠杆菌。不清楚用超声能不能破碎，应该用液氮研磨比较好。要是可以用超声的话，可以把ep管放在冰上。与组织接触的仪器部分都要认真处理吧，要不会是RNA降解的。
祝好运啊！
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坚持就是胜利
2楼2012-05-17 08:43:48
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-05-17 14:45:25
ljapril: 金币+2 2012-07-19 10:25:33
脑部？应该是很容易裂解的组织。加入Trizol后用枪反复吸打多次即可裂解。可见组织均匀分散在Trizol里即已裂解，也可在吹散后静置上5-10min确保裂解。
超声也不是不可以，但相对来说麻烦。且超声放热多少对RNA有些影响。且如是接触式的探头，容易引入污染。
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伟大航线....
3楼2012-05-17 09:01:13
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ljapril

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by karin at 2012-05-17 08:43:48:
没有用超声破碎过动物组织，破碎过大肠杆菌。不清楚用超声能不能破碎，应该用液氮研磨比较好。要是可以用超声的话，可以把ep管放在冰上。与组织接触的仪器部分都要认真处理吧，要不会是RNA降解的。
祝好运啊！

1.5的EP管怎么放液氮进去啊？组织就那么一点点，也不好取出来啊
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4楼2012-05-17 11:50:42
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