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l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我得建议是检查下你的同源臂的特异性,从获得kan抗性的菌中扩增下抗性基因,如果真的是致死突变,可以考虑换条件启动子。
相信自己
11楼2012-06-14 13:25:01
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xiangquanju

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by syn1985 at 2012-05-19 09:08:20
楼主是咋样确定敲的是致死基因的啊...

恩,别人的文章里面说的
12楼2012-06-15 00:23:33
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xiangquanju

金虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by fwks3518 at 2012-05-19 09:42:27
先引入质粒替补表达该基因,然后在基因组上敲除...

请问有相关的protocol么?
13楼2012-06-15 00:24:03
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xiangquanju

金虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by l68266152 at 2012-06-14 13:25:01
我得建议是检查下你的同源臂的特异性,从获得kan抗性的菌中扩增下抗性基因,如果真的是致死突变,可以考虑换条件启动子。

已经确定是致死突变了
请问你有敲除致死突变基因的相关测了么,我自己试了将含有目的基因的质粒转入了细胞里面,然后再敲除基因组DNA,但是还是没成功,不知道是不是我想的太简单了
14楼2012-06-15 00:25:49
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shunfeng12

铜虫 (初入文坛)

我想请教一下,你敲除的目的基因是多大的?可用于敲除技术的目的基因范围是多少?
15楼2012-07-09 20:11:00
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灰血动物

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

目测 发生了非特异性重组, 将你的PCR片段 整合到基因组其他位置了~~另外我想问下你的片段浓度是多少?
未完成
16楼2012-09-11 13:06:30
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