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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助各位用red系统敲除大肠杆菌基因的虫友们~~~
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l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我得建议是检查下你的同源臂的特异性，从获得kan抗性的菌中扩增下抗性基因，如果真的是致死突变，可以考虑换条件启动子。
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相信自己
11楼2012-06-14 13:25:01
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xiangquanju

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by syn1985 at 2012-05-19 09:08:20
楼主是咋样确定敲的是致死基因的啊...

恩，别人的文章里面说的
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12楼2012-06-15 00:23:33
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xiangquanju

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by fwks3518 at 2012-05-19 09:42:27
先引入质粒替补表达该基因，然后在基因组上敲除...

请问有相关的protocol么？
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13楼2012-06-15 00:24:03
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xiangquanju

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by l68266152 at 2012-06-14 13:25:01
我得建议是检查下你的同源臂的特异性，从获得kan抗性的菌中扩增下抗性基因，如果真的是致死突变，可以考虑换条件启动子。

已经确定是致死突变了
请问你有敲除致死突变基因的相关测了么，我自己试了将含有目的基因的质粒转入了细胞里面，然后再敲除基因组DNA，但是还是没成功，不知道是不是我想的太简单了
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14楼2012-06-15 00:25:49
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shunfeng12

铜虫 (初入文坛)
我想请教一下，你敲除的目的基因是多大的？可用于敲除技术的目的基因范围是多少？
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15楼2012-07-09 20:11:00
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灰血动物

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

目测 发生了非特异性重组， 将你的PCR片段 整合到基因组其他位置了~~另外我想问下你的片段浓度是多少？
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未完成
16楼2012-09-11 13:06:30
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