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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 挑菌扩大培养提不出质粒
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陈帅印

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励新虫 2012-05-12 23:03:42
菌200rpm生长在14个小时左右提质粒，时间长了菌状态不好，就提不出质粒了。还有抗生素冻融次数过多就失效了。
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11楼2012-05-12 18:20:58
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xiongyaoling

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是由于摇菌间过长，导致的菌体死亡，所以提不出质粒！你可以试试摇短一点时间，同时还可以同时做个阳性对照看看是不是抗生素失效！
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12楼2012-05-13 09:02:46
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damaomao

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
13楼2012-05-13 09:06:25
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Renavatio

木虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by damaomao at 2012-05-13 09:06:25:
试一下将提取的质粒用冷乙醇浓缩

你的意思是浓度可能不够是吧
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Undefined！
14楼2012-05-13 09:25:15
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lfangd1

新虫 (小有名气)
请问，我的蓝白斑实验一直只有白斑，没有见过蓝斑，挑菌检时全是阴性，连的是pmd18-t,感受态是DH5α。请问你的蓝白斑是怎样做的啊
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15楼2012-05-13 21:32:00
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xiazhiwuxie

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-14 13:43:41
我没做过蓝白斑，一般都是抗性筛选，然后需要做菌液PCR，最后才做扩大培养和小抽，基本没有什么问题。也有一次做载体构建，菌液PCR没有问题，但是扩繁后死活抽不出质粒，后来换了感受态就解决了。
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16楼2012-05-14 09:43:34
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damaomao

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
17楼2012-05-15 09:04:31
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damaomao

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
18楼2012-05-15 09:05:13
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shenlin0514

木虫 (正式写手)

无名小虫

【答案】应助回帖

★ ★
Renavatio: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-15 13:10:09
如果是时间太长，菌体发生沉淀，有可能是菌体凋亡，释放质粒被降解，而产生的沉淀可能为细胞碎片
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Never say never
19楼2012-05-15 11:43:05
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sarah_lz

金虫 (小有名气)
楼主应该是操作失误加混东西了，重做一次就好了，这个没有那么复杂
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20楼2012-05-15 13:25:40
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