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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 固相多肽合成中的cleavage和沉淀多肽问题
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lvziyu

铁虫 (正式写手)

[求助] 固相多肽合成中的cleavage和沉淀多肽问题

固相多肽合成中交联树脂的步骤已经搞定了  只是wang树脂的切割和沉淀不知道怎么搞 我做的肽链有13个长度 fmoc保护已经脱掉了  侧链上的保护基有tBu和Trt
树脂的切割溶剂没有统一的标准 恩 我自己用的是TFA 水 苯酚 茴香硫醚 EDT（1,2-乙二硫醇）配置的   可EDT的味道特别的大 扛不住
切割树脂后的滤液加到乙醚中也没有明显的沉淀 只是有乳浊状的  抽滤之后没有拿到沉淀 之后离心拿到的产物是黄色油状的  感觉有问题
恩  求做过多肽固相合成的大侠指导 不胜感激！！！
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1楼 2012-05-11 08:15:54
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lvziyu

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by qiaoshu177 at 2012-05-11 11:55:40:
Reagent K中不止EDT臭，苯甲硫醚一样很臭很难闻，含硫的有机化合物这样。冰乙醚不能用冰箱弄，可以用冰浴做嘛，很快的，半小时就能冷下来了。用10倍以上都可以的。

相对而言 苯甲硫醚要比EDT好不少 恩恩  灰常感谢！！！
滤出切割了的树脂你是怎么做的  用G2的带砂芯的抽滤漏斗抽滤么？
我用布式漏斗加普通的滤纸抽滤 发现滤液有固体颗粒 不知道是不是树脂。。。。。。
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6楼2012-05-11 12:06:13
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qiaoshu177

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lvziyu: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-05-11 09:46:45
lvziyu: 回帖置顶 2012-05-25 09:48:41
我感觉是你的切割溶剂出了问题，常用的切割溶剂有两种：Reagent B（TFA/苯酚/水/Tis=88.5：5：5：2.5）和Reagent K（TFA/苯酚/苯甲硫醚/水/EDT=82.5：5：5：5：2.5）。估计你想用的是Reagent K，那还是需要按比例配制的，切割的反应时间为2~2.5h，之后的滤液加到10倍体积以上的冰乙醚中，振摇均匀，冰浴中静止约30min，离心收集沉淀（注意：不能过滤，否则会因多肽的粘附而损失很多产物）。
因为使用Reagent K，侧链上的tBu和Trt 都应该被脱除，得到的应该是没有保护的多肽。还有切割溶剂的量大约为1g树脂用1mL切割试剂就足够，用多了反而会造成不易获得沉淀。
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2楼2012-05-11 08:58:08
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lvziyu

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by qiaoshu177 at 2012-05-11 08:58:08:
我感觉是你的切割溶剂出了问题，常用的切割溶剂有两种：Reagent B（TFA/苯酚/水/Tis=88.5：5：5：2.5）和Reagent K（TFA/苯酚/苯甲硫醚/水/EDT=82.5：5：5：5：2.5）。估计你想用的是Reagent K，那还是需要按比例 ...

恩 是不是含有trt的基团只能用reagent K来切割了？   反应时间和乙醚的量都没有问题 只是乙醚要用的冰的么  直接把乙醚放冰箱里面？ 听说会爆的呀 恩  乙醚挥发也很快 是不是应该加十倍以上的量呢？
没有做振摇均匀，冰浴中静止约30min    直接抽滤的  抽滤之后发现木有沉淀  之后离心得到的东西粘糊糊的
EDT的味道确实太难闻了  受不了啊 嘿嘿
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3楼2012-05-11 09:52:56
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lvziyu

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by qiaoshu177 at 2012-05-11 08:58:08:
我感觉是你的切割溶剂出了问题，常用的切割溶剂有两种：Reagent B（TFA/苯酚/水/Tis=88.5：5：5：2.5）和Reagent K（TFA/苯酚/苯甲硫醚/水/EDT=82.5：5：5：5：2.5）。估计你想用的是Reagent K，那还是需要按比例 ...

恩  听说reagent K中可以用1,3-二甲氧基苯代替EDT 是这样的么
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4楼2012-05-11 10:01:06
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