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abaiwoaini

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】关于蛋白多肽合成与修饰的两个问题。已有4人参与

一、固相合成某多肽(比如AABBCCDDEE):
法一:从羧基端的E开始,合成到氨基端的A。
法二:将序列反过来写EEDDCCBBAA,从羧基端的A开始,合成到氨基端的E。

请问如此两种方法得到的多肽,空间构象完全一致吗,是否合成的方向不同会产生影响?

二、将蛋白多肽经PEG修饰,如果完全在DMF(二甲基甲酰胺)介质体系中反应是否会对蛋白多肽的空间构象产生不可逆的影响。
见过有文描述“DMF(二甲基甲酰胺)作为高浓度膜变性剂能通过破坏多肽的二级结构而助溶。”不知这个影响是否可逆?

请虫友多指教!
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bluezhang

木虫 (小有名气)

您好

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
wtf66(金币+1):谢谢参与 2010-05-19 13:17:16
我以前做过这方面工作谈一点感觉
1.这点可从生化关于蛋白质和多肽的命名中查找,确保合成序列完全一致,我以前合成过六十个以下氨基酸的多肽,空间构象没有问题。如果序列很长在有二硫键及氢键的作用有不同的 空间构象
2.不会影响其活性,在合成过程中DMF只是让多肽尽量舒展不蜷曲,把它从DMF中取出后就会恢复其自然状态,就如把老虎关在笼子里,只是限制他并不改变它,打开笼子老虎还会吃人。我们做过一百五十多个氨基酸的多肽都是在DMF状态下合成,最终都很好。我们合成过几百条多肽还没有出现您所说的情况。
2楼2010-05-17 09:41:27
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abaiwoaini

银虫 (小有名气)

多谢虫友!

“我以前合成过六十个以下氨基酸的多肽,空间构象没有问题。”

这个序列您从两个方向合成后,构象一致?

您是如何判断构象的一致性的?
3楼2010-05-18 22:53:19
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bluezhang

木虫 (小有名气)

您好!


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
刚看到您的信息,我接的多肽用固相合成法,都是从N端开始的,还没有做过接一条多肽用两种方式合成的,不过你放心,多肽和蛋白质还差太远,它们的空间结构复杂性还难以同蛋白质相提并论,做多肽合成要先把多肽合成出来,然后再探讨空间构想,如果先谈论构像再考虑合成,那我们的结晶牛胰岛素也合成不出来了,一句话放心做,不要庸人自扰
4楼2010-06-02 21:06:10
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G_D1314

银虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by bluezhang at 2010-06-02 21:06:10
刚看到您的信息,我接的多肽用固相合成法,都是从N端开始的,还没有做过接一条多肽用两种方式合成的,不过你放心,多肽和蛋白质还差太远,它们的空间结构复杂性还难以同蛋白质相提并论,做多肽合成要先把多肽合成出 ...

从N端开始的多肽固相合成?这位大哥可以详细说说或者推荐一些文献让小弟学习一下么?
我坚信我的等待,我坚持我的选择
5楼2015-04-24 17:24:54
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zhouruiyi203

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by bluezhang at 2010-05-17 09:41:27
我以前做过这方面工作谈一点感觉
1.这点可从生化关于蛋白质和多肽的命名中查找,确保合成序列完全一致,我以前合成过六十个以下氨基酸的多肽,空间构象没有问题。如果序列很长在有二硫键及氢键的作用有不同的 空间 ...

合成这么长的多肽,好厉害诶,请问您是用什么合成的?微波反应器?能参考一下您的实验步骤么?
6楼2017-07-06 09:44:36
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