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lvziyu

铁虫 (正式写手)

[求助] 固相多肽合成中的cleavage和沉淀多肽问题

固相多肽合成中交联树脂的步骤已经搞定了  只是wang树脂的切割和沉淀不知道怎么搞 我做的肽链有13个长度 fmoc保护已经脱掉了  侧链上的保护基有tBu和Trt
树脂的切割溶剂没有统一的标准 恩 我自己用的是TFA 水 苯酚 茴香硫醚 EDT(1,2-乙二硫醇)配置的   可EDT的味道特别的大 扛不住
切割树脂后的滤液加到乙醚中也没有明显的沉淀 只是有乳浊状的  抽滤之后没有拿到沉淀 之后离心拿到的产物是黄色油状的  感觉有问题
恩  求做过多肽固相合成的大侠指导 不胜感激!!!
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qiaoshu177

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

Reagent K中不止EDT臭,苯甲硫醚一样很臭很难闻,含硫的有机化合物这样。冰乙醚不能用冰箱弄,可以用冰浴做嘛,很快的,半小时就能冷下来了。用10倍以上都可以的。
5楼2012-05-11 11:55:40
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qiaoshu177

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lvziyu: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-05-11 09:46:45
lvziyu: 回帖置顶 2012-05-25 09:48:41
我感觉是你的切割溶剂出了问题,常用的切割溶剂有两种:Reagent B(TFA/苯酚/水/Tis=88.5:5:5:2.5)和Reagent K(TFA/苯酚/苯甲硫醚/水/EDT=82.5:5:5:5:2.5)。估计你想用的是Reagent K,那还是需要按比例配制的,切割的反应时间为2~2.5h,之后的滤液加到10倍体积以上的冰乙醚中,振摇均匀,冰浴中静止约30min,离心收集沉淀(注意:不能过滤,否则会因多肽的粘附而损失很多产物)。
因为使用Reagent K,侧链上的tBu和Trt 都应该被脱除,得到的应该是没有保护的多肽。还有切割溶剂的量大约为1g树脂用1mL切割试剂就足够,用多了反而会造成不易获得沉淀。
2楼2012-05-11 08:58:08
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lvziyu

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by qiaoshu177 at 2012-05-11 08:58:08:
我感觉是你的切割溶剂出了问题,常用的切割溶剂有两种:Reagent B(TFA/苯酚/水/Tis=88.5:5:5:2.5)和Reagent K(TFA/苯酚/苯甲硫醚/水/EDT=82.5:5:5:5:2.5)。估计你想用的是Reagent K,那还是需要按比例 ...

恩 是不是含有trt的基团只能用reagent K来切割了?   反应时间和乙醚的量都没有问题 只是乙醚要用的冰的么  直接把乙醚放冰箱里面? 听说会爆的呀 恩  乙醚挥发也很快 是不是应该加十倍以上的量呢?
没有做振摇均匀,冰浴中静止约30min    直接抽滤的  抽滤之后发现木有沉淀  之后离心得到的东西粘糊糊的
EDT的味道确实太难闻了  受不了啊 嘿嘿
3楼2012-05-11 09:52:56
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lvziyu

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by qiaoshu177 at 2012-05-11 08:58:08:
我感觉是你的切割溶剂出了问题,常用的切割溶剂有两种:Reagent B(TFA/苯酚/水/Tis=88.5:5:5:2.5)和Reagent K(TFA/苯酚/苯甲硫醚/水/EDT=82.5:5:5:5:2.5)。估计你想用的是Reagent K,那还是需要按比例 ...

恩  听说reagent K中可以用1,3-二甲氧基苯代替EDT 是这样的么
4楼2012-05-11 10:01:06
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