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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 巯基化后形成多多聚体
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ppares

新虫 (初入文坛)

[求助] 巯基化后形成多多聚体

请问各位战友是否有人用过traut‘s试剂对蛋白质或短肽巯基化，我在实验中利用该试剂巯基化后产生多聚体而不溶于水，请问是否应该加入DTT保护生成的巯基？应该什么时候加入？加入的DTT是否会与traut's试剂反应？
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1楼2012-05-09 21:00:54
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

加入DTT保护生成的巯基也是一种办法，可以是要避免一楼的情况，又要避免形成二硫键多聚体，可以反应体系放在充氮的容器中的进行，在反应的中后期可以加ＤＴＴ保护游离的巯基。不过我不明白，你为什么要在蛋白质表面产生高活性的游离巯基？
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3楼2012-05-09 22:03:27
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
ppares: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-14 23:05:08
Traut’s试剂（Traut’s Reagent）
修饰伯胺产生巯基基团。

特点
• 在pH7-9条件下与伯胺（赖氨酸ε氨基基团）反应
• 在巯基基团上添加短间隔末梢，可以作为巯基特异性交联或标记的靶点应用
• 含胺的间隔臂保存了最初被修饰的伯胺的电荷。
有副反应是肯定的，不过可以想法避开。首先在最适合的pH7-9条件下与伯胺（赖氨酸ε氨基基团）反应，修饰蛋白质的赖氨酸ε氨基基团；
其次加大Traut’s试剂的用量，比如与蛋白质的物质的量形成100:1；
反应之后用蛋白质分离方法，比如层析、离心等去掉多聚体或者分离出单体即可。
如果用DTT，会打开蛋白质的二硫键，这对修饰伯胺产生巯基基团可能有产物抑制作用，另外，打开蛋白质的二硫键，可能会暴露一些其内部的参与形成离子键或者在活性中心的赖氨酸侧链的ε氨基基团，形成新的修饰位点，引起蛋白质构想改变，进而影响蛋白质的功能，如果你的目的只是修饰蛋白质分子表面的的赖氨酸侧链的ε氨基基团的话。所以不建议使用DTT。
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2楼2012-05-09 21:58:30
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ppares

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 凌波丽 at 2012-05-09 22:03:27:
加入DTT保护生成的巯基也是一种办法，可以是要避免一楼的情况，又要避免形成二硫键多聚体，可以反应体系放在充氮的容器中的进行，在反应的中后期可以加ＤＴＴ保护游离的巯基。不过我不明白，你为什么要在蛋白质表 ...

非常感谢您的回答，我是要在短肽上面结巯基，进行下一步反应。我尝试了在通氮气的条件下反应，但是还是会产生沉淀。还有一点疑问是，加入的traut‘s越多不是会与反应生成的巯基进一步反应吗？为什么在蛋白巯基化中要100倍过量呢？我尝试了3-5倍过量，反应得到的沉淀物就少了一些，请问会不会是反应不完全呢？
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4楼2012-05-13 22:35:55
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guogang199

无虫 (正式写手)

空
那Trauts能配成储备液长期保存吗？
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5楼2013-03-02 09:35:42
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