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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 毕业在即，急！！！！！！
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

[交流] 毕业在即，急！！！！！！

本人从事分子实验，（PCR），主要是克隆一种植物中的一个酶的未知基因，先前从未有人研究过这种植物中的这个基因。之前做PCR，出来一段基因序列，经过序列相似度比对，确定是这个基因中的一段。然后，做RACE，但做了很长时间都没有东西出来，后面还要构建表达载体，做原核表达-------   哎！这不快毕业了吗！急呀！！！！！   后来跟导师交流，导师说做不出来没关系，只要工作量够了就可以毕业。  我就在想了，这个做分子的工作量怎么算呀？  整天做RACE，PCR就是不出东西，整天重复，这算工作量吗？  如果不算的话，那做分子的什么才算工作量？  我应该怎么攒这个工作量？   谢谢各位大侠帮忙@！！！
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1楼 2012-05-08 10:12:54
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jqq1985

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 股交流 2012-05-08 14:11:29
小丹木木: , 打字错误，更正一下。鼓励交流，欢迎常来 2012-05-08 14:12:12
以前我也出现过这种拿不到全基因的情况。当时我在NCBI里面找了好几个和我这个菌亲缘性很近的全集因组测通的种，然后对比这个基因及其上下游基因的同源性。一般如果亲缘性很近，那么他们基因同源性和基因排布方式都差不多，我用已有的片段设计引物，和上下游基因内部保守序列的引物对扩，拿到了目标基因上下游序列，也没有做RACE。植物应该内含子比较多，但是也可以一试。仅供参考。
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5楼2012-05-08 13:27:43
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宇宙心灵

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-08 18:53:23
可能引物设计存在问题，我以前做过从一株粘红酵母里面拉出一段未知的羰基还原酶基因，引物的设计十分关键。可以尝试利用已知片段作为引物通过walking拿到更多的片段，最好做ORF分析，祝楼主顺利毕业！
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13楼2012-05-08 16:02:50
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zoeye

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-09 14:04:17
我看我们实验室有个人做RACE据说只要有结果 只要你会YY就能分析很多的
你可以把拿到的序列从生信方面分析下 就是所谓的预测 看看啊好写
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14楼2012-05-09 09:48:41
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zhcosa

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
RACE不出来的问题，不知道这个基因有没有表达特异性啊，比如只在某个组织中表达，在其他组织里就是扩不出来。
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16楼2012-05-09 13:25:35
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137167741

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-09 19:13:39
工作量肯定是不好攒的，也不是做多态，微卫星什么的，所以说认真做实验才是王道。所以建议一下：
既然可以比较序列相似度，所以你就在其他物种中有这个相似的序列，那么就找那个相似度最大的来设计引物，多设计几条，然后来拉全长。
此外，因为有了部分序列，可以设计荧光定量引物，对其在不同组织，器官，部位，以及不同生长时期的表达量进行荧光定量，然后研究是表达趋势或者规律。这样做下来，那个工作量也蛮多的了。
祝你顺利毕业！
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18楼2012-05-09 16:42:16
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普通回帖

healerly

禁虫 (小有名气)
★
wushuwei1104(金币+1): 谢谢参与
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2楼2012-05-08 10:18:43
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by healerly at 2012-05-08 10:18:43:
做分子的结果容易出，但也不容易出。。。。。做分子主要是实验周期不是特别长，所以工作量的话，就听你们导师的吧，你导师不着急，你就不用着急。或者跟导师交流一下。。。。本科毕业很水的。。。。。。

我是研究僧！！！！
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3楼2012-05-08 10:22:36
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blackeye67

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这种新基因的克隆有时候就是这样的，为了保证能克隆出来，最好手头同时做几个基因的克隆。
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4楼2012-05-08 13:20:50
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chiden

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我还在想呢，一般的本科生论文谁着急啊。不过硕士的话，楼主建议你好好跟导师沟通沟通哦，别到时候延期就老火老
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6楼2012-05-08 13:31:14
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by chiden at 2012-05-08 13:31:14:
我还在想呢，一般的本科生论文谁着急啊。不过硕士的话，楼主建议你好好跟导师沟通沟通哦，别到时候延期就老火老

我可不想延期呀！！！
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7楼2012-05-08 15:07:02
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jqq1985 at 2012-05-08 13:27:43:
以前我也出现过这种拿不到全基因的情况。当时我在NCBI里面找了好几个和我这个菌亲缘性很近的全集因组测通的种，然后对比这个基因及其上下游基因的同源性。一般如果亲缘性很近，那么他们基因同源性和基因排布方式都 ...

我跟老师交流过了，老实说不出来没关系，只要工作量够了就可以毕业。眼看就要毕业了，这做分子整天重复PCR，工作量怎么证明？难道答辩的时候把实验过程中不成功的电泳图都贴上去，把测序后不对的测序单子和结果给答辩老师看吗？  简直愁死了！  怎么办呀？   就想问一问这工作量是怎么一回事？
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8楼2012-05-08 15:17:51
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by chiden at 2012-05-08 13:31:14:
我还在想呢，一般的本科生论文谁着急啊。不过硕士的话，楼主建议你好好跟导师沟通沟通哦，别到时候延期就老火老

我跟老师交流过了，老实说不出来没关系，只要工作量够了就可以毕业。眼看就要毕业了，这做分子整天重复PCR，工作量怎么证明？难道答辩的时候把实验过程中不成功的电泳图都贴上去，把测序后不对的测序单子和结果给答辩老师看吗？  简直愁死了！  怎么办呀？   就想问一问这工作量是怎么一回事？
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9楼2012-05-08 15:17:57
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by blackeye67 at 2012-05-08 13:20:50:
这种新基因的克隆有时候就是这样的，为了保证能克隆出来，最好手头同时做几个基因的克隆。

我跟老师交流过了，老实说不出来没关系，只要工作量够了就可以毕业。眼看就要毕业了，这做分子整天重复PCR，工作量怎么证明？难道答辩的时候把实验过程中不成功的电泳图都贴上去，把测序后不对的测序单子和结果给答辩老师看吗？  简直愁死了！  怎么办呀？   就想问一问这工作量是怎么一回事？
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10楼2012-05-08 15:18:09
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by healerly at 2012-05-08 10:18:43:
做分子的结果容易出，但也不容易出。。。。。做分子主要是实验周期不是特别长，所以工作量的话，就听你们导师的吧，你导师不着急，你就不用着急。或者跟导师交流一下。。。。本科毕业很水的。。。。。。

我跟老师交流过了，老实说不出来没关系，只要工作量够了就可以毕业。眼看就要毕业了，这做分子整天重复PCR，工作量怎么证明？难道答辩的时候把实验过程中不成功的电泳图都贴上去，把测序后不对的测序单子和结果给答辩老师看吗？  简直愁死了！  怎么办呀？   就想问一问这工作量是怎么一回事？
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11楼2012-05-08 15:18:20
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weining1203

新虫 (小有名气)
路过帮顶。。。
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12楼2012-05-08 15:19:28
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
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14楼: Originally posted by zoeye at 2012-05-09 09:48:41:
我看我们实验室有个人做RACE据说只要有结果 只要你会YY就能分析很多的
你可以把拿到的序列从生信方面分析下 就是所谓的预测 看看啊好写

关键是RACE没结果，只是出来一个小片段，全长还木有出来。YY是什么意思？  求指教！
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15楼2012-05-09 10:01:26
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
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16楼: Originally posted by zhcosa at 2012-05-09 13:25:35:
RACE不出来的问题，不知道这个基因有没有表达特异性啊，比如只在某个组织中表达，在其他组织里就是扩不出来。

哦，这个也有可能！ 谢谢楼主提醒！
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17楼2012-05-09 16:28:06
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
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18楼: Originally posted by 137167741 at 2012-05-09 16:42:16:
工作量肯定是不好攒的，也不是做多态，微卫星什么的，所以说认真做实验才是王道。所以建议一下：
既然可以比较序列相似度，所以你就在其他物种中有这个相似的序列，那么就找那个相似度最大的来设计引物，多设计几 ...

谢谢哥哥帮忙！！我会努力的！谢谢！！
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19楼2012-05-09 20:54:17
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dongfang12

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也是一直RACE，就是不出来，急惨了都
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20楼2012-05-09 22:45:49
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zoeye

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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14楼: Originally posted by zoeye at 2012-05-09 09:48:41:
我看我们实验室有个人做RACE据说只要有结果 只要你会YY就能分析很多的
你可以把拿到的序列从生信方面分析下 就是所谓的预测 看看啊好写

额。。。。。。YY这里就是自己找理论依据支持你的结论并预测
RACE有那么难P吗
或者你查查有没有人之前做过这个 先把别人做的建个库 然后跟你自己的结果对比 虽然一条少了点 总比没有结果好吧
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21楼2012-05-11 10:49:05
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