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elalei1999

铜虫 (小有名气)

[求助] 英文杂志编辑回复求助

小弟发英文，编辑回复中其中有一条：there is no direct evidence provided that the TAT provided is involved in rosmarinic acid  biosynthesis。（如何证明TAT在迷迭香酸合成途径中。）
我们在试验中克隆得到了活性物质RA代谢途径中的一个关键酶，并获得序列，但编辑要求我们提供直接证据来证明此酶是途径中的一个酶。请高人指路，需要做什么实验，提供什么实验结果，才能证明我们获得的酶（其基因片段已得到）是已知的植物次生代谢产物合成途径中的一个关键酶呢？
谢谢大家了。
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不抛弃，不放弃！
1楼 2012-05-07 22:09:35
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njyang2006

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-05-08 14:08:43
代谢和合成还是不一样的。
合成要看具体途径有哪些。De nove？ Salvage？Regeneration？
针对不同的途径进行考察。
如果是de nove的话，就从最初的底物（如GTP什么的）开始利用，一步一步知道合成你要的RA
如果是Salvage途径，也要找到其底物以及相应的中间产物。
只有这样完整的进行，才能说明你克隆表达的酶确实是参与了RA的合成
具体可以去KEGG找一下你的RA的合成途径或代谢网络图
赞一下 回复此楼
2楼2012-05-07 23:17:00
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xiaoyanzi517

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-08 14:08:55
加入此酶的抑制剂，做一组对照（不加抑制剂）实验，看看两组试验之后，迷迭香的产量是否有差异
赞一下 回复此楼
偶时晴天偶时雨
3楼2012-05-08 12:31:56
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