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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒小提的试剂盒一个柱子最多能提多少ml的菌液啊
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明辨是非

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒小提的试剂盒一个柱子最多能提多少ml的菌液啊

我们实验室比较穷一些做转染嫌去内毒素的大提试剂盒太贵了只能用平时的质粒小提试剂盒代替 之前的师哥用此法做转染虽然转染率低但是也成功了
实验室为了节省柱子师哥师姐们都是反复使用的 不知道用没有同样做法的虫友 想请教下要是提100ml的菌液（DH5α）最少用几个吸附柱啊 或者说一个吸附柱最多能处理多少ml的菌液 我们的试剂盒是biomiga的pd1211－01 按说明书上来是一个柱子1～4ml的菌液
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1楼 2012-05-02 21:19:09
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CY.Force

新虫 (初入文坛)
个人经验，这的看你需要多少的质量的质粒了，加多了菌液，提出来的质粒的质量也不会增加多少的，甚至会影响吸附能力，因为试剂的裂解能力是一定的！
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11楼2014-01-01 12:20:06
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vir2008

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-03 13:52:23
明辨是非: 金币+5, ★★★很有帮助, 好的 我试了下 菌液多的 跑出来更亮 2012-05-05 16:46:46
一般就是不超过4ml。我为了尽可能得到更多的质粒，也常用4ml，但从没敢更多。

个人感觉：小提试剂盒往往很难满足要求。如果转染率不高，逼得后面做G418筛选之类的事，那就得不偿失了。用不起Qiagen，天根也行啊。
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2楼2012-05-02 23:23:24
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longrna

新虫 (正式写手)
★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-03 13:52:32
每个柱子有它本身最大的结合质粒能力（可从厂家处获得）。如30ug。
理论上讲，如果1ml菌里有1ug质粒，则可以用30ml的菌制的上清过一个柱子（裂解液那些要按比例增加即你不能用裂解4ml的体系来裂解30ml菌）。但柱子的另外的一个问题是会产生堵塞：杂质太多或太粘稠容易堵，视上清情况而定。
故，究竟可以使用多少的菌液仍需要你自己的摸索。而不同的菌或不同的质粒肯定也不一样。
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伟大航线....
3楼2012-05-03 08:59:43
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个与菌液没有关系吧，与质粒DNA的量有关，每个柱子都有一定的承载量
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4楼2012-05-03 09:19:59
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