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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA电泳
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saliangqh

新虫 (正式写手)

[交流] DNA电泳

跑DNA电泳的亲们 交流一下DNA电泳吧 谢谢了


这是我跑的电泳
用CTAB法提取
将样品加20μl SDS和1ml预热的CTAB提取液，在65℃下水浴1h，其每间隔5min轻轻摇晃，加入等体积的苯酚：氯仿：异戊醇=25:24:1，在漩涡混合器上震荡混匀，10000r4℃离心10min，取上清加1ml冷冻的无水乙醇和50μl乙酸钠（3M PH=5）-20℃冷冻1h，10000r4℃离心10min，用70%无水乙醇洗涤2次，干燥后加TE溶解，-20℃保存备用。
0.8%琼脂糖电泳 染色10min 凝胶成像
出来的图像是这样的 想请大家帮分析一下 谢谢

[ Last edited by saliangqh on 2012-5-2 at 17:11 ]
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1楼 2012-05-01 21:07:56
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saliangqh

新虫 (正式写手)
西瓜: 回帖置顶 2012-05-08 18:55:50
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2楼: Originally posted by muc_huanliu at 2012-05-01 22:37:51:
呵呵，楼主想问什么呢？电泳这个词汇太单一了，建议说具体问题。

谢谢了 我想请您帮忙分析一下我的电泳为什么跑出来的带这样 如何改进可跑出更好的带
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10楼2012-05-02 17:13:14
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saliangqh

新虫 (正式写手)
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3楼: Originally posted by 杜保群 at 2012-05-01 23:36:13:
是啊  太笼统了   还是具体一些好

谢谢了 我想请您帮忙分析一下我的电泳为什么跑出来的带这样 如何改进可跑出更好的带
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11楼2012-05-02 17:13:21
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saliangqh

新虫 (正式写手)
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4楼: Originally posted by 308630949 at 2012-05-02 09:47:58:
你想交流什么？我觉得还好吧，没什么困难的...

谢谢了 我想请您帮忙分析一下我的电泳为什么跑出来的带这样 如何改进可跑出更好的带
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12楼2012-05-02 17:13:31
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saliangqh

新虫 (正式写手)
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5楼: Originally posted by 可帅儿 at 2012-05-02 09:54:55:
要说什么呢？

谢谢了 我想请您帮忙分析一下我的电泳为什么跑出来的带这样 如何改进可跑出更好的带
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13楼2012-05-02 17:13:37
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saliangqh

新虫 (正式写手)
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6楼: Originally posted by chenguestc at 2012-05-02 11:14:46:
没明白意图楼主，请说明你的具体交流项目

谢谢了 我想请您帮忙分析一下我的电泳为什么跑出来的带这样 如何改进可跑出更好的带
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14楼2012-05-02 17:13:53
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saliangqh

新虫 (正式写手)
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8楼: Originally posted by 超然渡陈 at 2012-05-02 15:12:59:
你就只说一个交流电泳，宽的没边没际了……

谢谢了 我想请您帮忙分析一下我的电泳为什么跑出来的带这样 如何改进可跑出更好的带
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15楼2012-05-02 17:14:03
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saliangqh

新虫 (正式写手)
送鲜花一朵
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9楼: Originally posted by zhixuec at 2012-05-02 16:56:39:

谢谢了 我想请您帮忙分析一下我的电泳为什么跑出来的带这样 如何改进可跑出更好的带
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16楼2012-05-02 17:14:17
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saliangqh

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4楼: Originally posted by 308630949 at 2012-05-02 09:47:58:
你想交流什么？我觉得还好吧，没什么困难的...

谢谢了 我想请您帮忙分析一下我的电泳为什么跑出来的带这样 我这是提的藻类中的DNA 如何改进可跑出更好的带
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17楼2012-05-02 17:15:50
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saliangqh

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19楼: Originally posted by summerjane at 2012-05-02 20:11:05:
请问楼主你提取的是不是基因组DNA？
如果是基因组DNA琼脂糖电泳的结果就是这种模糊的（smear），没有清晰的条带

是呢 不过我这个还有没有能跑出的稍微好点 这样也太不清晰了
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20楼2012-05-02 20:40:11
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saliangqh

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22楼: Originally posted by longrna at 2012-05-03 08:52:22:
胶配的不怎么样，marker跑成那样。
描述的提取步骤太模糊了，什么样品、裂解液浓度、操作动作、上清体积、加乙醇体积、电泳条件等等都没说清楚。
如果是基因组DNA，建议使用lambdaDNA/HindIII maker。
如果是提 ...

谢谢 呵呵 我提的是发菜中的DNA  我用的CTAB法 你可否给我一个准确好的提取方法 我没有加蛋白酶和RNA酶
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23楼2012-05-03 17:27:26
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saliangqh

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25楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-05-04 12:48:49:
我觉得这应该不是电泳的问题，而是你提取的DNA的问题！
若果是电泳问题，MAKER应该也会呈现拖尾现象。但是MAKER跑的还不错，所以可能是你提取的DNA有问题！   楼主是提取质粒还是普通DNA？

是普通的DNA
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26楼2012-05-06 18:17:56
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saliangqh

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27楼: Originally posted by 后悔无期 at 2012-05-06 22:24:48:
我了解楼主是什么意思，楼上有几位没看明白，楼主跑的琼脂糖凝胶电泳检测DNA条带。条带不清晰，不太亮，marker好像跑的也不太好！PCR 能不能P的出来存在的情况有很多种，任何一个环节都有可能，任何一个小的动作， ...

恩 好的 谢谢 可否问一下楼主用什么提取藻类中的DNA效果好啊
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28楼2012-05-07 20:27:36
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saliangqh

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29楼: Originally posted by longrna at 2012-05-08 14:46:17:
样品应该能用液氮研磨吧？研磨充分一点，然后缩短一点水浴时间（降解降解的的可能性），水浴20-30min。
加入酚氯仿后不要用涡旋仪，改用手轻柔颠倒20-30min混匀（对提取完整性好的gDNA有所帮助。）
在上清前加入 ...

谢谢 我再试试做做 看看效果如何
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30楼2012-05-08 19:13:08
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saliangqh

新虫 (正式写手)
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31楼: Originally posted by uneei at 2012-05-09 13:00:52:
前面的说的很对，就是RNA污染加上DNA片段降解加打断了，看你的点样孔还很亮，估计还有蛋白多糖之类的污染，混匀什么的步骤你动作轻柔一点，我以前也这样过，不过后来换了试剂盒提就没这种问题了。在23KB处非常清晰 ...

恩 谢谢了 楼主 我们还没有药品
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32楼2012-05-09 14:36:36
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