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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 透析 蛋白沉淀 复性
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jamy1989

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by danbomingyue at 2012-05-08 10:44:26:
我想问一下，你能否采用稀释复性后上柱？一定要用透析方法吗？我知道有得项目一般是变性以后直接稀释N倍，过夜低温复性，然后上柱分离层析，不知道你的产品是否可以这样做？

我试过，直接稀释的话蛋白也全沉淀出来了，最后溶进去的很少！
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qwdr
11楼2012-05-10 10:52:32
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jamy1989

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by danbomingyue at 2012-05-09 12:14:28:
稀释同样可以复性的!不一定非的完全去除尿素！

关键是复性以后要过柱纯化，过柱是要用高浓度的咪唑洗脱的！
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qwdr
12楼2012-05-10 10:55:38
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danbomingyue

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
13楼2012-05-10 13:31:45
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jamy1989

木虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by danbomingyue at 2012-05-10 13:31:45:
我想蛋白沉淀出来了是不是可以考虑改变PH？这样有没有效果？

这个已经试过了，改变PH还是无法再溶解！
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qwdr
14楼2012-05-10 22:43:43
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jamy1989

木虫 (小有名气)
我的binding buffer配方是20mM 磷酸钠  500mM Nacl 5mM咪唑！
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qwdr
15楼2012-05-16 22:14:14
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tomorrowhl

新虫 (初入文坛)
会不会是复性的温度不对？
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16楼2012-05-16 22:26:55
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jamy1989

木虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by tomorrowhl at 2012-05-16 22:26:55:
会不会是复性的温度不对？

都是在4度冰箱里的！应该不会出问题！
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qwdr
17楼2012-05-16 22:33:15
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红虫梦

新虫 (初入文坛)
其实你可以试一下直接稀释，但是复性缓冲液中要加一定量的urea,等复性完之后，再透析除盐。我现在就是这样做的。
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jamy1989
梦想
18楼2012-05-21 10:12:55
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jamy1989

木虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
18楼: Originally posted by 红虫梦 at 2012-05-21 10:12:55:
其实你可以试一下直接稀释，但是复性缓冲液中要加一定量的urea,等复性完之后，再透析除盐。我现在就是这样做的。

好的，可以试一下！
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qwdr
19楼2012-05-21 10:37:25
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大琦小颖

新虫 (初入文坛)
请问楼主这个问题解决了吗？我最近做复性也是 我采用的是梯度透析复性 但是在最后去除变性剂的过程就会大量沉淀 各种助溶剂都试过了 就是没有用 蛋白浓度在0.1mg/ml 左右 而且缓冲液ph离等电点>2 虐心啊 我们可以讨论讨论
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20楼2013-05-29 18:53:28
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