透析蛋白沉淀复性 - 生物科学 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

qwdr

11楼2012-05-10 10:52:32

jamy1989

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5楼: Originally posted by danbomingyue at 2012-05-09 12:14:28:
稀释同样可以复性的!不一定非的完全去除尿素！

关键是复性以后要过柱纯化，过柱是要用高浓度的咪唑洗脱的！

qwdr

12楼2012-05-10 10:55:38

danbomingyue

禁虫 (正式写手)

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13楼2012-05-10 13:31:45

jamy1989

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13楼: Originally posted by danbomingyue at 2012-05-10 13:31:45:
我想蛋白沉淀出来了是不是可以考虑改变PH？这样有没有效果？

这个已经试过了，改变PH还是无法再溶解！

qwdr

14楼2012-05-10 22:43:43

jamy1989

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我的binding buffer配方是20mM 磷酸钠 500mM Nacl 5mM咪唑！

qwdr

15楼2012-05-16 22:14:14

tomorrowhl

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会不会是复性的温度不对？

16楼2012-05-16 22:26:55

jamy1989

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16楼: Originally posted by tomorrowhl at 2012-05-16 22:26:55:
会不会是复性的温度不对？

都是在4度冰箱里的！应该不会出问题！

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17楼2012-05-16 22:33:15

红虫梦

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其实你可以试一下直接稀释，但是复性缓冲液中要加一定量的urea,等复性完之后，再透析除盐。我现在就是这样做的。

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jamy1989

梦想

18楼2012-05-21 10:12:55

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18楼: Originally posted by 红虫梦 at 2012-05-21 10:12:55:
其实你可以试一下直接稀释，但是复性缓冲液中要加一定量的urea,等复性完之后，再透析除盐。我现在就是这样做的。

好的，可以试一下！

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19楼2012-05-21 10:37:25

大琦小颖

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请问楼主这个问题解决了吗？我最近做复性也是我采用的是梯度透析复性但是在最后去除变性剂的过程就会大量沉淀各种助溶剂都试过了就是没有用蛋白浓度在0.1mg/ml 左右而且缓冲液ph离等电点>2 虐心啊我们可以讨论讨论

20楼2013-05-29 18:53:28