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johnny4890

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by chenguestc at 2012-05-02 11:05:25:
DEPC处理操作器具,离心管枪头等很重要,包括75%乙醇也用DEPC水配置和最好溶解RNA的无酶水。

75%的乙醇我是先往离心管里加250ul的水再加750ul的乙醇。其它的器具都是刚拆封的。
11楼2012-05-02 13:51:18
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johnny4890

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by trizol11 at 2012-05-02 10:36:25:
你买的RNA专用的,最好也要在DEPC水里面泡一下,再灭后使用。细胞最好是用液氮研磨。第9步弃完上清,在把空管离一下。跑胶是将RNA稀释到40倍左右,你再试试。

空管离心的目的是为了把壁上的rna离下来吗,如果离心后看到还有乙醇残留要继续晾干吗?
12楼2012-05-02 13:52:45
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johnny4890

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by weng1988 at 2012-05-01 14:44:26:
毕业设计一直在做这个工作,只不过我提的是植物的。还是DEPC处理过比较放心,虽然比较麻烦。貌似RNA降解的比较厉害,试试用试剂盒提提,或许有帮助。

嗯,这次我就打算用RNeasy mini KIT提,希望可以。
13楼2012-05-02 13:53:54
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小小鸽飞

新虫 (小有名气)


小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-04 13:37:48
从第二次看,貌似rna好多降解了,还有污染,做好灭菌工作,试试试剂盒做吧,方便快捷,用时间短,我见过我师姐用磁珠法提取的,效果很不错的,她经常用河南惠尔的纳米磁珠,测得OD 值还挺好的
既然选择了远方,便只顾风雨兼程
14楼2012-05-03 09:51:07
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johnny4890

新虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 小小鸽飞 at 2012-05-03 09:51:07:
从第二次看,貌似rna好多降解了,还有污染,做好灭菌工作,试试试剂盒做吧,方便快捷,用时间短,我见过我师姐用磁珠法提取的,效果很不错的,她经常用河南惠尔的纳米磁珠,测得OD 值还挺好的

你师姐提的是什么菌的?
15楼2012-05-03 16:01:57
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

引用回帖:
5楼: Originally posted by johnny4890 at 2012-04-30 21:23:02:
这些用具我都是买的rna操作专用的,就是那个超净台做什么操作的都有,没有专用的。。。

这样的话,那个超净台里可能RNA酶还比外面多(虽然细菌啥的少),不如在外面找个人少的干净角落来做。我自己就是在外面做的,没有问题。
16楼2012-05-03 17:50:03
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

★ ★
小丹木木: 金币+2 2012-05-04 13:38:22
引用回帖:
7楼: Originally posted by trizol11 at 2012-05-02 10:36:25:
你买的RNA专用的,最好也要在DEPC水里面泡一下,再灭后使用。细胞最好是用液氮研磨。第9步弃完上清,在把空管离一下。跑胶是将RNA稀释到40倍左右,你再试试。

个人认为RNA专用的就不必再折腾了,用DEPC水处理额外多不少工作,更容易引入污染啊。个人意见。
17楼2012-05-03 17:51:37
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trizol11

木虫 (正式写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by johnny4890 at 2012-05-02 13:52:45:
空管离心的目的是为了把壁上的rna离下来吗,如果离心后看到还有乙醇残留要继续晾干吗?

把酒精离下来,继续晾干。
任重道远……
18楼2012-05-03 22:06:51
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hanghongtao

新虫 (初入文坛)

我也做的植物的,提取的枪头,ep管以及水都是用DEPC水处理过的,可是每次提取RNA都不是很理想,marker倒是跑的不错,但我用别的植物材料同样的方法提取的效果还不错,有可能是我的植物材料太特别了,不易提取RNA,不知道有没有高手能指导一下啊
19楼2012-05-03 22:45:01
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小小鸽飞

新虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 小小鸽飞 at 2012-05-03 09:51:07:
从第二次看,貌似rna好多降解了,还有污染,做好灭菌工作,试试试剂盒做吧,方便快捷,用时间短,我见过我师姐用磁珠法提取的,效果很不错的,她经常用河南惠尔的纳米磁珠,测得OD 值还挺好的

枯草杆菌还有金黄色葡萄球菌,
既然选择了远方,便只顾风雨兼程
20楼2012-05-06 22:48:26
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