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iugogo

铜虫 (小有名气)

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[求助] RNA干涉

请教一下大家，我最近做RNA干涉，dsRNA的浓度分别用了50，100，150ng/ul，ddH2O溶解，以ddH2O处理和未做任何处理的样品为对照。处理3天后做荧光定量发现，3种浓度的处理都比对照上调了好多倍，不知道是什么原因，请教一下！（模板测序过，是正确的）

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iugogo

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1楼 2012-04-29 23:19:46

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iugogo

铜虫 (小有名气)

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引用回帖:

6楼: Originally posted by dongyingqian at 2013-05-29 11:29:22
有个问题请教楼主，做对照用的dd水，有PH要求吗。还有注射量是多少啊，我最近也想做呢

我是用的DEPC处理水，没调PH值，用试剂盒里的buffer也行。根据注射对象的大小吧，要试一下，我注射的是虫子，有一个绿豆那么大，0.5微升左右，也死了一些，多了会死更多

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7楼2013-05-29 17:40:03

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heath666

金虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

1，确定RNAi是否有效。因为不是所有设计的dsRNA都会有效果，而且你只选择一个72h时间点是不够的，建议多设计几对dsRNA，并且多加几个时间点。
2，原则上RNA水平也不能完全代替蛋白水平，可以再用WB等检测下蛋白水平。
3，即使以上条件都满足，有的时候也确实存在这个问题，原因还不确定，可能与脱靶效应或者不同基因的相互作用有关。

希望能有帮助！

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2楼2012-04-30 13:02:29

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