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haihaome

铁虫 (初入文坛)

[求助] 关于Illumina Solexa如何区分不同碱基荧光

我最近在看关于高通量测序的文章,但是Solexa的测序原理看完下面两段话就有些困惑了:
Solexa测序的反应在叫做flow cell的玻璃管中进行,flow cell又被细分成8个Lane,每个Lane的内表面有无数的被固定的单链接头。上述步骤得到的带接头的DNA 片段变性成单链后与测序通道上的接头引物结合形成桥状结构,以供后续的预扩增使用。
    在测序的flow cell中加入四种荧光标记的dNTP 、DNA 聚合酶以及接头引物进行扩增,在每一个测序簇延伸互补链时,每加入一个被荧光标记的dNTP就能释放出相对应的荧光,测序仪通过捕获荧光信号,并通过计算机软件将光信号转化为测序峰,从而获得待测片段的序列信息。
第一:形成的桥式PCR产物如何形成单链直PCR?
第二:最不明白的就是将带接头的DNA片段加入到玻璃管内是像454的单一的DNA片段还是很多种不同的DNA片段混合,如果是混合片段的话,加入不同的碱基发出不同的荧光怎么区分是从哪一种DNA片段中发出来的呢?
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