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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 今天第一次做蛋白质电泳,出现的怪事!
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janedcm

银虫 (小有名气)

[交流] 今天第一次做蛋白质电泳,出现的怪事!

今天是我第一次做蛋白质电泳, 出现了一些不该有的现象:
1.样品没有在浓缩胶中压缩成一条线,而是较宽的带,
2.当样品走到分离胶中下部时,中部的溴酚蓝消失了,而出现了黄色的物质,
3.当样品继续向下走时,几乎全部的蓝色都消失了,都变成了黄色,
4.当要把胶从玻璃板了取下时,浓缩胶部分几乎都粘到了玻璃板上, 无法整块的取下, 而分离胶部分则易碎,也不能整块取下,
我发现在我把样品煮沸后,体积增大了,可能是进水了, 电泳槽是新买的，电泳仪是旧的，听说配电泳缓冲液要用无菌水，而我开始没有用无菌水，所以后来我就把电泳缓冲液灭菌了，但是后来发现pH变了，所以我也认为缓冲液可以也是不合适的，但是黄色物质的出现，我就不知是为何了， 还有其他几个现象我也不知如何解释，请各位高手帮忙，谢谢！
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1楼 2007-04-06 21:27:08
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liyxok

银虫 (小有名气)
★ ★
asr(金币+2):Thanks!
1 没被压缩成线的问题，可能是开始时电流过大，一般浓缩胶小电流，分离胶大电流，此外还要保持胶的温度不要过高，开冷却水。
2 胶去不下来，原因可能是玻璃板没洗干净。一般先用洗衣粉泡，清水冲洗，再用酒精擦洗，用蒸馏水冲洗，晾干。一定要洗干净才行。
3 缓冲液pH一定要准确测定，是电泳成功的关键因素，浓度不易过高。
4 上样前离心
5 胶浓度大了易脆
欢迎交流
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Blog:http://liyxkkk.blog.163.com/ 主页：http://n.99081.com/liyxok/
2楼2007-04-06 23:49:54
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janedcm

银虫 (小有名气)
лл!лл!
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3楼2007-04-07 08:07:02
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ntu-knight

★
asr(金币+1):Thanks!
其实我也遇到过这种情况,可能是Tris缓冲液配的不对,PH值是很重要的,你最好重新配一下,用考马斯亮蓝考染一下,看看蛋白的条带.总之,PH值在蛋白质电泳中是很重要的.
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4楼2007-04-07 18:07:37
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mapleleaf7410

木虫 (正式写手)
★
asr(金币+1):Thanks!
没必要用无菌水配缓冲液。你的样品要离心去沉淀。
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5楼2007-04-08 16:04:47
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TAMAHOME

金虫 (小有名气)
还有在制胶的时候让其凝固时间长一些，凝的过程中不要晃动胶板，保正胶凝的均匀，胶凝的不均匀的话跑的时候也会出问题。
样品可能也没处理好，上样前要离下心。
还有分离胶的浓度是不是大了一些，可适当降低一些
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让死者有那不朽的名，但让生者有那不朽的爱──
6楼2007-04-08 22:44:32
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perl86

新虫 (初入文坛)
蛋白胶的电泳缓冲夜中SDS量对胶条带很重要。
上样缓冲液PH值 会影响溴粉蓝的颜色 也会影响条带
浓缩胶不要太短，上胶电流控制在10~15mM，下胶为25mM左右
上样量不要太大，可作梯度上样
上样前 90度处理2分钟后离心上样
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7楼2007-04-09 06:45:59
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janedcm

银虫 (小有名气)
非常感谢这么多人给我支招!谢谢!
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8楼2007-04-09 22:20:55
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niuwa2000

银虫 (小有名气)
分离胶的PH出问题了.检查8.8那个TRIS,后者你的电极缓冲液的PH.溴酚蓝颜色变黄，就是说明体系PH值不对.溴酚蓝不光是给你看看电泳跑怎么样的，更关键是它还是一个PH指示剂,在偏碱的时候是蓝的，但是到偏酸的时候是黄色的.一般电泳书上好象应该都有提到的吧?
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9楼2007-04-09 22:22:05
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janedcm

银虫 (小有名气)
我又跑了一次蛋白质电泳,这次没有出现第一次时出现的现象,但是又出现了另一种怪现象:在分离胶和浓缩胶相接处,但是在分离胶内出现了一条较宽的条带,这条带把所有的样全连在一起，这条带的浓度很均匀，不知道这说明了什么，还有MARKER没有跑开，应该有的六条带，只有三条看的清，还是要请教各位，再帮我分析一下。谢谢！
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10楼2007-04-10 22:56:05
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