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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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janedcm

银虫 (小有名气)

[交流] 今天第一次做蛋白质电泳,出现的怪事!

今天是我第一次做蛋白质电泳, 出现了一些不该有的现象:
1.样品没有在浓缩胶中压缩成一条线,而是较宽的带,
2.当样品走到分离胶中下部时,中部的溴酚蓝消失了,而出现了黄色的物质,
3.当样品继续向下走时,几乎全部的蓝色都消失了,都变成了黄色,
4.当要把胶从玻璃板了取下时,浓缩胶部分几乎都粘到了玻璃板上, 无法整块的取下, 而分离胶部分则易碎,也不能整块取下,
我发现在我把样品煮沸后,体积增大了,可能是进水了, 电泳槽是新买的,电泳仪是旧的,听说配电泳缓冲液要用无菌水,而我开始没有用无菌水,所以后来我就把电泳缓冲液灭菌了,但是后来发现pH变了,所以我也认为缓冲液可以也是不合适的,但是黄色物质的出现,我就不知是为何了, 还有其他几个现象我也不知如何解释,请各位高手帮忙,谢谢!
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liyxok

银虫 (小有名气)

★ ★
asr(金币+2):Thanks!
1 没被压缩成线的问题,可能是开始时电流过大,一般浓缩胶小电流,分离胶大电流,此外还要保持胶的温度不要过高,开冷却水。
2 胶去不下来,原因可能是玻璃板没洗干净。一般先用洗衣粉泡,清水冲洗,再用酒精擦洗,用蒸馏水冲洗,晾干。一定要洗干净才行。
3 缓冲液pH一定要准确测定,是电泳成功的关键因素,浓度不易过高。
4 上样前离心
5 胶浓度大了易脆
欢迎交流
Blog:http://liyxkkk.blog.163.com/ 主页:http://n.99081.com/liyxok/
2楼2007-04-06 23:49:54
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janedcm

银虫 (小有名气)

лл!лл!
3楼2007-04-07 08:07:02
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ntu-knight


asr(金币+1):Thanks!
其实我也遇到过这种情况,可能是Tris缓冲液配的不对,PH值是很重要的,你最好重新配一下,用考马斯亮蓝考染一下,看看蛋白的条带.总之,PH值在蛋白质电泳中是很重要的.
4楼2007-04-07 18:07:37
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mapleleaf7410

木虫 (正式写手)


asr(金币+1):Thanks!
没必要用无菌水配缓冲液。你的样品要离心去沉淀。
5楼2007-04-08 16:04:47
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TAMAHOME

金虫 (小有名气)

还有在制胶的时候让其凝固时间长一些,凝的过程中不要晃动胶板,保正胶凝的均匀,胶凝的不均匀的话跑的时候也会出问题。
样品可能也没处理好,上样前要离下心。
还有分离胶的浓度是不是大了一些,可适当降低一些
让死者有那不朽的名,但让生者有那不朽的爱──
6楼2007-04-08 22:44:32
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perl86

新虫 (初入文坛)

蛋白胶的电泳缓冲夜中SDS量对胶条带很重要。
上样缓冲液PH值 会影响溴粉蓝的颜色 也会影响条带
浓缩胶不要太短,上胶电流控制在10~15mM,下胶为25mM左右
上样量不要太大,可作梯度上样
上样前 90度处理2分钟后离心上样
7楼2007-04-09 06:45:59
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janedcm

银虫 (小有名气)

非常感谢这么多人给我支招!谢谢!
8楼2007-04-09 22:20:55
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niuwa2000

银虫 (小有名气)

分离胶的PH出问题了.检查8.8那个TRIS,后者你的电极缓冲液的PH.溴酚蓝颜色变黄,就是说明体系PH值不对.溴酚蓝不光是给你看看电泳跑怎么样的,更关键是它还是一个PH指示剂,在偏碱的时候是蓝的,但是到偏酸的时候是黄色的.一般电泳书上好象应该都有提到的吧?
9楼2007-04-09 22:22:05
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janedcm

银虫 (小有名气)

我又跑了一次蛋白质电泳,这次没有出现第一次时出现的现象,但是又出现了另一种怪现象:在分离胶和浓缩胶相接处,但是在分离胶内出现了一条较宽的条带,这条带把所有的样全连在一起,这条带的浓度很均匀,不知道这说明了什么,还有MARKER没有跑开,应该有的六条带,只有三条看的清,还是要请教各位,再帮我分析一下。谢谢!
10楼2007-04-10 22:56:05
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