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happywyh

铁虫 (小有名气)

[交流] 手提质粒

手提质粒（碱裂解法）
质粒为pMD18-t,2639bp，
取的质粒直接电泳，有三条条带，且相距很远
初步怀疑最小的条带是环状质粒，中间的条带是开环，最大（孔附近）的是基因组，求高手指点
电泳图是隔夜拍的，条带很浅~~
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1楼 2012-04-23 21:23:39
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zgb1982

木虫 (正式写手)
★
happywyh(金币+1): 谢谢参与
太弱啦，自配溶液提会很亮的啊。
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2楼2012-04-23 22:20:12
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果子么么茶

木虫 (著名写手)
★
happywyh(金币+1): 谢谢参与
最大的在胶孔附近 不好说是基因组 像是没跑出来 是蛋白没除干净吧
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3楼2012-04-23 22:28:22
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天使托

专家顾问 (职业作家)
★
happywyh(金币+1): 谢谢参与
质粒有三条：从下往上为：超螺旋 环状 开环。。。。
匹配自己的marker寻找你的条带吧。。。
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4楼2012-04-23 22:42:13
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freerain

禁虫 (职业作家)
★
happywyh(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽
5楼2012-04-24 01:47:16
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freerain

禁虫 (职业作家)
★
happywyh(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽
6楼2012-04-24 01:48:31
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sl35537417

木虫 (正式写手)
最主要的问题是你隔夜了  
条带弥散不清了  
重跑
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7楼2012-04-24 04:48:09
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happywyh

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zgb1982 at 2012-04-23 22:20:12:
太弱啦，自配溶液提会很亮的啊。

手提几次，条带都不清楚，菌体量增加也没什么效果（RNA含量蹭的多了），没找到原因
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8楼2012-04-24 08:27:04
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happywyh

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 果子么么茶 at 2012-04-23 22:28:22:
最大的在胶孔附近 不好说是基因组 像是没跑出来 是蛋白没除干净吧

核酸电泳，拍照时波长在280nm或260nm处，蛋白在此处有吸光度值吗？
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9楼2012-04-24 08:28:31
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happywyh

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by freerain at 2012-04-24 01:47:16:
质粒肯定是有，
好像RNA很多也影响电泳，用RNase处理一下再看看

ok~RNA太多了，严重影响心情
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10楼2012-04-24 08:29:21
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happywyh

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by sl35537417 at 2012-04-24 04:48:09:
最主要的问题是你隔夜了  
条带弥散不清了  
重跑

勉强还是可以分析的~~
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11楼2012-04-24 08:30:12
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___戊_

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们都是用试剂盒提的质粒  感觉还是很好的哈
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12楼2012-04-24 10:41:51
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liaotiantian

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是不是溶液II配制有问题呀，加溶液II了混匀一定要轻微。我也是用手提，效果都还不错额。
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13楼2012-04-25 10:14:21
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happywyh

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by liaotiantian at 2012-04-25 10:14:21:
是不是溶液II配制有问题呀，加溶液II了混匀一定要轻微。我也是用手提，效果都还不错额。

溶液II 水880,10M NaOH 20,10% SDS 100，用时现配的，加入后菌液很快变澄清了...没有发现有什么问题
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14楼2012-04-25 16:45:12
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