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happywyh

铁虫 (小有名气)


[交流] 手提质粒

手提质粒(碱裂解法)
质粒为pMD18-t,2639bp,
取的质粒直接电泳,有三条条带,且相距很远
初步怀疑最小的条带是环状质粒,中间的条带是开环,最大(孔附近)的是基因组,求高手指点
电泳图是隔夜拍的,条带很浅~~
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zgb1982

木虫 (正式写手)



happywyh(金币+1): 谢谢参与
太弱啦,自配溶液提会很亮的啊。
2楼2012-04-23 22:20:12
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果子么么茶

木虫 (著名写手)



happywyh(金币+1): 谢谢参与
最大的在胶孔附近 不好说是基因组 像是没跑出来 是蛋白没除干净吧
3楼2012-04-23 22:28:22
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happywyh(金币+1): 谢谢参与
质粒有三条:从下往上为:超螺旋 环状 开环。。。。
匹配自己的marker寻找你的条带吧。。。
4楼2012-04-23 22:42:13
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freerain

禁虫 (职业作家)


happywyh(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽

5楼2012-04-24 01:47:16
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freerain

禁虫 (职业作家)


happywyh(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽

6楼2012-04-24 01:48:31
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sl35537417

木虫 (正式写手)


最主要的问题是你隔夜了  
条带弥散不清了  
重跑
7楼2012-04-24 04:48:09
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happywyh

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by zgb1982 at 2012-04-23 22:20:12:
太弱啦,自配溶液提会很亮的啊。

手提几次,条带都不清楚,菌体量增加也没什么效果(RNA含量蹭的多了),没找到原因
8楼2012-04-24 08:27:04
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happywyh

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
3楼: Originally posted by 果子么么茶 at 2012-04-23 22:28:22:
最大的在胶孔附近 不好说是基因组 像是没跑出来 是蛋白没除干净吧

核酸电泳,拍照时波长在280nm或260nm处,蛋白在此处有吸光度值吗?
9楼2012-04-24 08:28:31
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happywyh

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
5楼: Originally posted by freerain at 2012-04-24 01:47:16:
质粒肯定是有,
好像RNA很多也影响电泳,用RNase处理一下再看看

ok~RNA太多了,严重影响心情
10楼2012-04-24 08:29:21
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happywyh

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
7楼: Originally posted by sl35537417 at 2012-04-24 04:48:09:
最主要的问题是你隔夜了  
条带弥散不清了  
重跑

勉强还是可以分析的~~
11楼2012-04-24 08:30:12
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___戊_

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我们都是用试剂盒提的质粒  感觉还是很好的哈
12楼2012-04-24 10:41:51
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liaotiantian

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
是不是溶液II配制有问题呀,加溶液II了混匀一定要轻微。我也是用手提,效果都还不错额。
13楼2012-04-25 10:14:21
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happywyh

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
13楼: Originally posted by liaotiantian at 2012-04-25 10:14:21:
是不是溶液II配制有问题呀,加溶液II了混匀一定要轻微。我也是用手提,效果都还不错额。

溶液II 水880,10M NaOH 20,10% SDS 100,用时现配的,加入后菌液很快变澄清了...没有发现有什么问题
14楼2012-04-25 16:45:12
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