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czlx

铜虫 (初入文坛)

[求助] pcr

我做多重pcr,按文献条件做不出的,哪位知道优化条件啊?????
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dmzha

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议参考我的硕士论文《基于线粒体DNA序列的鹿产品分子检测》。
6楼2012-04-19 08:12:35
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castlered

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
文献上的条件不一定适合你自己,调整引物浓度,比例,退火温度等多试试吧,多重本身就不是特别稳定的
2楼2012-04-18 16:06:09
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czlx

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by castlered at 2012-04-18 16:06:09:
文献上的条件不一定适合你自己,调整引物浓度,比例,退火温度等多试试吧,多重本身就不是特别稳定的

我有8对引物,怎么调整比例啊?是希望出现的那对引物多一些吗?
3楼2012-04-18 16:54:13
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castlered

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by czlx at 2012-04-18 16:54:13:
我有8对引物,怎么调整比例啊?是希望出现的那对引物多一些吗?

你只扩增一个样品么?一般来说调整使整个体系对不同样品扩增的产物亮度差不多。比如引物A,B,C,D分别对应样品1,2,3,4,如果扩增结果1的产物相对2,3,4比较弱,就稍微多加一些引物A。如果有非特异就提高退火温度,不出就降低,总之各种尝试。做多重就天天一波波地PCR吧
4楼2012-04-18 17:15:11
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