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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 镍柱 纯化
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ding_winnie

无虫 (小有名气)

[求助] 镍柱 纯化

新人求助：镍柱纯化的具体方法，越详细越好！还有如何用凝血酶切除标签？
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1楼 2012-04-14 20:56:06
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jinbangming

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by ding_winnie at 2012-04-16 15:49:00:
djj_njut@163.com 谢谢~~

请查收邮件
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9楼2012-04-17 15:44:45
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
总体上分三步，结合，漂洗和洗脱，主要是利用不同浓度的咪唑进行上述步骤的，具体的参数记不住了，但是买主材料时有一个小册子，里面有详细的说明书
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3楼2012-04-15 08:08:12
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ghs25372216

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ding_winnie: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-04-16 15:49:41
西瓜: 金币+1, 欢迎常来！ 2012-04-16 21:12:37
本帖内容被屏蔽
4楼2012-04-15 09:35:28
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to-be

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-16 13:59:29
ding_winnie: 回帖置顶 2012-04-16 15:49:46
ding_winnie: 金币+6, ★★★很有帮助 2012-04-16 15:50:15
1.将柱子挂好镍，最好用buffer或者低浓度咪唑洗下柱子，低温待用。
2.将诱导好的菌体溶在合适buffer（pH，盐浓度和种类需要摸索）中重悬，超声破碎菌体，高速离心，取上清过柱子。流速低于2mL/min即可。
3.用不同浓度的咪唑进行分级梯度洗脱蛋白，会将杂质和目标蛋白分离开，梯度需要摸索。
4.将获得的样品分别取样SDS-PAGE检测，包括诱导的菌，沉淀上清都电泳检测。
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生活是面镜子~
5楼2012-04-15 13:26:17
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