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ding_winnie无虫 (小有名气)
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[求助]
镍柱 纯化
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3楼2012-04-15 08:08:12
ghs25372216
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4楼2012-04-15 09:35:28
【答案】应助回帖
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1.将柱子挂好镍，最好用buffer或者低浓度咪唑洗下柱子，低温待用。 2.将诱导好的菌体溶在合适buffer（pH，盐浓度和种类需要摸索）中重悬，超声破碎菌体，高速离心，取上清过柱子。流速低于2mL/min即可。 3.用不同浓度的咪唑进行分级梯度洗脱蛋白，会将杂质和目标蛋白分离开，梯度需要摸索。 4.将获得的样品分别取样SDS-PAGE检测，包括诱导的菌，沉淀上清都电泳检测。 |
5楼2012-04-15 13:26:17
aoaoshch
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【答案】应助回帖
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ding_winnie: 金币+9, ★★★很有帮助 2012-04-16 15:50:26
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镍柱嘛，应该有说明书的。 先洗净柱体，垫片，然后装上柱材（蓝色液体）。 用BUFFER配不同浓度咪唑，NTA0、20、40、60、80、100、200、400。 用水过个20ml，再过NTA0，然后把你的蛋白液上柱子，依次用NTA梯度液洗脱，把收集的滤液检测活性。 用NTA400洗柱子10ml吧，再过水20ml，装满20%乙醇4℃保存柱子。 大体是这样子。我没有电子版的说明书，问问师兄师姐吧，应该有人做过。 祝你好运 |
6楼2012-04-16 11:48:15
