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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 镍柱 纯化
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ding_winnie

无虫 (小有名气)

[求助] 镍柱 纯化

新人求助：镍柱纯化的具体方法，越详细越好！还有如何用凝血酶切除标签？
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1楼 2012-04-14 20:56:06
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ghs25372216

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ding_winnie: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-04-16 15:49:41
西瓜: 金币+1, 欢迎常来！ 2012-04-16 21:12:37
本帖内容被屏蔽
4楼2012-04-15 09:35:28
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
总体上分三步，结合，漂洗和洗脱，主要是利用不同浓度的咪唑进行上述步骤的，具体的参数记不住了，但是买主材料时有一个小册子，里面有详细的说明书
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3楼2012-04-15 08:08:12
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to-be

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-16 13:59:29
ding_winnie: 回帖置顶 2012-04-16 15:49:46
ding_winnie: 金币+6, ★★★很有帮助 2012-04-16 15:50:15
1.将柱子挂好镍，最好用buffer或者低浓度咪唑洗下柱子，低温待用。
2.将诱导好的菌体溶在合适buffer（pH，盐浓度和种类需要摸索）中重悬，超声破碎菌体，高速离心，取上清过柱子。流速低于2mL/min即可。
3.用不同浓度的咪唑进行分级梯度洗脱蛋白，会将杂质和目标蛋白分离开，梯度需要摸索。
4.将获得的样品分别取样SDS-PAGE检测，包括诱导的菌，沉淀上清都电泳检测。
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生活是面镜子~
5楼2012-04-15 13:26:17
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aoaoshch

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-04-16 13:59:46
ding_winnie: 金币+9, ★★★很有帮助 2012-04-16 15:50:26
镍柱嘛，应该有说明书的。
先洗净柱体，垫片，然后装上柱材（蓝色液体）。
用BUFFER配不同浓度咪唑，NTA0、20、40、60、80、100、200、400。
用水过个20ml，再过NTA0，然后把你的蛋白液上柱子，依次用NTA梯度液洗脱，把收集的滤液检测活性。
用NTA400洗柱子10ml吧，再过水20ml，装满20%乙醇4℃保存柱子。
大体是这样子。我没有电子版的说明书，问问师兄师姐吧，应该有人做过。
祝你好运
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6楼2012-04-16 11:48:15
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