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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 镍柱 纯化
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ding_winnie

无虫 (小有名气)

[求助] 镍柱 纯化

新人求助：镍柱纯化的具体方法，越详细越好！还有如何用凝血酶切除标签？
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1楼2012-04-14 20:56:06
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clare2007

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流！ 2012-05-02 18:47:33
PBS破碎细胞
10mM 咪唑上柱。20、50、100、300mM分别洗，记得每个都要留样。每个洗10-20mM。网上有Qiagen等公司的说明书都可以下到。
每个蛋白的纯化都需要摸索。酶切除标签也是，酶切的时间和ＰＨ等　都需要摸索
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12楼2012-05-02 15:11:50
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
总体上分三步，结合，漂洗和洗脱，主要是利用不同浓度的咪唑进行上述步骤的，具体的参数记不住了，但是买主材料时有一个小册子，里面有详细的说明书
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3楼2012-04-15 08:08:12
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ghs25372216

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ding_winnie: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-04-16 15:49:41
西瓜: 金币+1, 欢迎常来！ 2012-04-16 21:12:37
本帖内容被屏蔽
4楼2012-04-15 09:35:28
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to-be

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-16 13:59:29
ding_winnie: 回帖置顶 2012-04-16 15:49:46
ding_winnie: 金币+6, ★★★很有帮助 2012-04-16 15:50:15
1.将柱子挂好镍，最好用buffer或者低浓度咪唑洗下柱子，低温待用。
2.将诱导好的菌体溶在合适buffer（pH，盐浓度和种类需要摸索）中重悬，超声破碎菌体，高速离心，取上清过柱子。流速低于2mL/min即可。
3.用不同浓度的咪唑进行分级梯度洗脱蛋白，会将杂质和目标蛋白分离开，梯度需要摸索。
4.将获得的样品分别取样SDS-PAGE检测，包括诱导的菌，沉淀上清都电泳检测。
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生活是面镜子~
5楼2012-04-15 13:26:17
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查看全部 12 个回答
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫 论文翻译-EnPapers美助理教授团队-SCI英文润色
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