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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 菌种培养复苏几个问题
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kirby13

禁虫 (初入文坛)
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1楼 2012-04-13 13:41:49
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雷杨琴

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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zhang8826857: 金币+3, good 2012-04-16 23:07:53
你这实验做得太开放了。（1）甘油保存菌可以保存一年左右，但期间不能反复冻融，会对其造成巨大的伤害，活性会随着你反复冻融的次数呈指数级下降；建议最好一次多保存几管；（2）LB液体最好不要放太久了，现用现配灭菌最好；（3）紫外灭菌？？紫外的穿透力很弱的，看有文献报道说隔了一层很薄的玻璃紫外都不能穿透，因此紫外灭菌仅能用于物体表面灭菌。（4）基本操作：将LB液体培养基、接种环、酒精灯放在超净工作台上，紫外灭菌半个小时，不开通风；再将带菌平板放入，用酒精棉球擦拭手，晾干后点燃酒精灯；将接种环烧红，特别是接口处要多烧一下；等其冷却几十秒后挑取单个菌落接种于液体培养基中，整个过程平板最好不要离火焰10cm外，完后同样要烧灼接种环；怎么拿平板需要你师兄或师姐教一下，多拿空平板试几次就熟练了。实验都是最基础的，慢慢就好了，孰能生巧！继续努力！
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3楼2012-04-16 20:11:30
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+2, good 2012-04-16 23:07:44
没做过甘油菌这个菌种，但是大多数的菌种基本都是这样操作的。

如果培养基中没有添加缓冲液，最好还是测试下pH。

1.5g琼脂足够了，凝固度不高？会不会你太心急了，放在培养箱中过夜再用试试，同时可以判断有没有污染。

建议复苏的时候用TSB肉汤和TSA琼脂同时进行。

不太清楚这个无菌操作台，现在弄微生物都用生物安全柜，像你这种情况就用前照紫外（关闭通风），用时当然不能开紫外了，不开通风，点酒精灯，在火焰附近操作。
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环境卫生、微生物学、卫生应急
2楼2012-04-16 10:51:35
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Joicesidy

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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甘油保存菌种应该在零下70摄氏度保存，估计是你的菌种不行了
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4楼2012-04-17 10:18:07
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champions

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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你的1.5g琼脂的量是可以的，我们都加2%，不凝的原因可能跟你没调pH有关，过酸得得情况下会降低琼脂的凝固性，我们也遇到过划破平板的情况，原因是琼脂粉质量不好。 后面的问题不是很懂，不过你可以试着多活化几次。
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5楼2012-04-17 20:05:00
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kirby13

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6楼2012-04-27 21:44:04
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清风雅月

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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1.琼脂是日本琼脂还是国产的？不同厂家凝胶强度不同，日本的凝胶强度一般较高，倒平板时是否晃匀？
2.甘油保存菌种如果冻存操作步骤没问题的话4个月因该不会死，问题可能出在培养基上，3个多月时间太长。原则：禁止反复冻融。
3.平板应倒置培养，紫外灭菌时不能开风机，关紫外线后开风机20分钟以后再操作，超菌台可以放酒精灯，生物安全柜禁止放，酒精灯火焰向一边不影响操作，原则：操作在火焰10cm范围内。
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7楼2012-04-28 09:42:24
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huanghaiyu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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1、培养基不能凝固，估计是和你用的琼脂有关，PH不调一般也就是6-7之间，不会太低，如果PH很低会影响凝固的效果，琼脂的含量一般是1%-2@之间，所以你加的琼脂也在正常范围，一般我们就用日本产的，用量少、效果好，培养基的颜色也很好。你可以再试试加大琼脂的量，顺便也测PH值，以确定真是的影响因素。
2、甘油管一般要放置在-70度，而且不宜经常取用，活化的效果不好，一方面可能与你的培养基有关，另外就是你们做的甘油管的质量，如果之前用的没有问题，那就可能是反复的冻融使得菌体死亡。你可以将甘油管多选几种培养基试试，也可以将甘油管浓缩再用。
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8楼2012-04-28 11:12:16
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xxnly

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1. 加入琼脂后一定要煮沸一下，然后再进行其他处理。你在配制的过程中没有煮沸，琼脂不是一个均匀的状态。如果按照你之前的方法，你容器底部那些培养基凝固度应该比较高。或者将培养基摇匀后再到平板，效果会好一些。
2. 隔夜培养之后如果澄清的话，我认为可以考虑再培养1到2d看看，因为菌株在冰箱内放置太久，生长速度可能会减慢。
3. 灭菌的时候只开紫外， 紫外可以杀菌，产生的臭氧也可以杀菌，杀菌结束后就需要开风了。
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啊！我要毕业了……天！赐我一份工作吧！
9楼2012-04-28 18:43:58
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dajian007

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10楼2012-08-27 17:01:06
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