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杨文心

木虫 (小有名气)

[交流] DEAE-纤维素分离多糖时若盐浓度高于糖能否通过稀释来富集多糖?已有5人参与

请问我用DEAE-纤维素柱层析来分离多糖,若样液中盐浓度过高则多糖很难吸附,或者边吸附边洗脱下来,效果肯定不好的。那么我如果将样液稀释很多倍,使其中盐浓度降下来再过柱,这样能富集到我的多糖么?担心稀释样液的同时糖含量也同样稀释了,因为糖和盐(Cl-)是竞争吸附的,原本样液中盐浓度就比糖浓度高,稀释后尽管浓度都下降了,但盐的浓度应该还是会比糖浓度高的,这样过DEAE柱能只吸附糖而不吸附盐么?求赐教!!!
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豆哥

主管区长 (职业作家)

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★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-04-10 17:52:09
怎么不先脱盐呢?透析一下。
边学边问,才有学问。
2楼2012-04-10 11:23:15
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lihuan0525

金虫 (职业作家)


leecius: 金币+1, 谢谢! 2012-04-11 08:52:46
我觉得也是先脱盐,
3楼2012-04-10 14:48:41
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杨文心

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 豆哥 at 2012-04-10 11:23:15:
怎么不先脱盐呢?透析一下。

我要的目标二糖分子量太小了,只有340左右,透析不太可行的,想过过凝胶柱除盐,但因为我是合成反应制备的糖,反应液会比较大,浓缩后再过柱依然会很大量的。就是不知道DEAE能不能达到这个效果呢?
4楼2012-04-10 16:56:51
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杨文心

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lihuan0525 at 2012-04-10 14:48:41:
我觉得也是先脱盐,

我要的目标二糖分子量太小了,只有340左右,透析不太可行的,想过过凝胶柱除盐,但因为我是合成反应制备的糖,反应液会比较大,浓缩后再过柱依然会很大量的。就是不知道DEAE能不能达到这个效果呢?
5楼2012-04-10 16:57:09
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lihuan0525

金虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 杨文心 at 2012-04-10 16:57:09:
我要的目标二糖分子量太小了,只有340左右,透析不太可行的,想过过凝胶柱除盐,但因为我是合成反应制备的糖,反应液会比较大,浓缩后再过柱依然会很大量的。就是不知道DEAE能不能达到这个效果呢?

一般纯化蛋白的话,仅仅靠一根柱子是不行的,除非是用亲和层析,打不分还是要用3根以上的。
6楼2012-04-10 22:38:41
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杨文心

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by lihuan0525 at 2012-04-10 22:38:41:
一般纯化蛋白的话,仅仅靠一根柱子是不行的,除非是用亲和层析,打不分还是要用3根以上的。

打算先DEAE柱粗分一下,再用Sephadex G25细分,不过反应液盐太多了,除盐方法还得摸索一下。
7楼2012-04-11 10:20:25
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mssj300130

铜虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
karl2100: 金币+1, 谢谢回帖! 2012-04-12 00:33:33
你为什么不先看看直接上样,流穿的二糖回收率是多少,如果比较高的话不就解决了吗,前后平行测个浓度看看;如果你的反应做的很好,应该副产物不多吧,如果回收率比较低的话再尝试稀释,反正只需要取一部分就可以了小试就行了,这么小的糖还真没挂过离子;另外如果你只有Cl的话能不能调调pH,然后蒸干了呢,应该也能试一下
你想用G-25除盐的话可以尝试,主要看你340的糖能不能在内水之前出了,好像G-25是1-5K吧,如果是去除单糖的话估计希望不大
8楼2012-04-11 12:37:15
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杨文心

木虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by mssj300130 at 2012-04-11 12:37:15:
你为什么不先看看直接上样,流穿的二糖回收率是多少,如果比较高的话不就解决了吗,前后平行测个浓度看看;如果你的反应做的很好,应该副产物不多吧,如果回收率比较低的话再尝试稀释,反正只需要取一部分就可以了 ...

我的反应液可能比较杂,大部分是盐类。原本希望过葡聚糖凝胶把副产物除掉的,但是因为量太大了,比较麻烦。你的建议不错,可以试试看下。另外,G25对球蛋白分离范围是1000-5000,但是对于线性葡聚糖,分离范围是可达到100-5000的。
9楼2012-04-11 22:13:28
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gsli1987

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以试一下用丙酮沉淀脱盐
每个人都生来孤独
10楼2012-04-12 18:28:11
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