应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体问题
141/2返回列表12下一页
查看: 1155  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

anxiuhong

新虫 (初入文坛)

[求助] 抗体问题

大家好，最近找公司做了一个抗体，发现抗体显示的带不是我的目的条带，图片上面是SDS-PAGE染色的胶，下面是Westen的片子，点样顺序在图片下方，我的蛋白是拟南芥总蛋白，我的目的带是38kd。想问一下SDS中最亮的那条大约55kD的带是什么东西，并且western检测的条带也大约是55kd的，我觉得就是SDS上的那条最亮的带，请问是抗体不特异造成的吗？还是其他原因？谢谢！

上面：SDS-PAGE  下面：Western blot
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2012-04-06 12:16:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qjy_134

铜虫 (小有名气)
你在SDS-PAGE 标记一下靶带的位置
赞一下 回复此楼
2楼2012-04-06 12:35:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是抗体重链吧..........
赞一下 回复此楼
3楼2012-04-06 13:14:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qjy_134

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
ＳＤＳ上最亮的死５５ＫＤ,不是你的靶带了？　这样的话你免疫的蛋白不纯，下面最粗的也是５５ＫＤ位置蛋白。
赞一下 回复此楼
4楼2012-04-06 13:32:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anxiuhong

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by qjy_134 at 2012-04-06 12:35:29:
你在SDS-PAGE 标记一下靶带的位置

我的图片Marker标记的大小没有完全显示，SDS-PAGE图片最右边是fermentas的彩虹marker，从上到下箭头所指为100,70,55,40kd,我的靶蛋白应该就在最下面那个箭头附近，最左边是easysee marker。western图片最右边是easysee  marker，箭头应该是40kd的位置，4和5之间的marker是fermentas的彩虹marker，我每次显影都只能显出100和70kd的带，比较上下两张图片我觉得显出来的带差不多是55的带
赞一下 回复此楼
5楼2012-04-06 14:37:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anxiuhong

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gongeleven at 2012-04-06 13:14:47:
可能是抗体重链吧..........

我们实验室做CoIP的遇到抗体重链的问题，但是做了那么多抗体只有我的western出现了这个问题，如果真是重链那这个抗体还能用吗 或者有什么方法去除
赞一下 回复此楼
6楼2012-04-06 14:51:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anxiuhong

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gongeleven at 2012-04-06 13:14:47:
可能是抗体重链吧..........

我对重链轻链的概念不清楚，但是我觉得要真是重链的话是不是这八个样品显示的带应该是同样亮度的吧，但是，他们的亮度不一致，正好与上面SDS-PAGE的亮度差不多
赞一下 回复此楼
7楼2012-04-06 14:59:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by anxiuhong at 2012-04-06 14:59:49:
我对重链轻链的概念不清楚，但是我觉得要真是重链的话是不是这八个样品显示的带应该是同样亮度的吧，但是，他们的亮度不一致，正好与上面SDS-PAGE的亮度差不多

两条重链轻链，通过二硫键等组成抗体分子，抗体分子量约150kd，如果是还原胶，则轻重链会分开，电泳时候就会看到两种链
赞一下 回复此楼
8楼2012-04-06 15:11:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anxiuhong

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by gongeleven at 2012-04-06 15:11:19:
两条重链轻链，通过二硫键等组成抗体分子，抗体分子量约150kd，如果是还原胶，则轻重链会分开，电泳时候就会看到两种链

那就是说如果这显示的是重链的话，那么我的抗体不是完整的了，也就不能标记我的靶蛋白了？那怎么才能消除重链轻链呢？谢谢！
赞一下 回复此楼
9楼2012-04-06 15:19:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
anxiuhong: 金币+1, ★有帮助 2012-04-07 10:06:51
引用回帖:
9楼: Originally posted by anxiuhong at 2012-04-06 15:19:52:
那就是说如果这显示的是重链的话，那么我的抗体不是完整的了，也就不能标记我的靶蛋白了？那怎么才能消除重链轻链呢？谢谢！

试图搞清楚原因，这个抗体是怎么表达出来的，杂交瘤表达的？公司交付抗体时候有什么qc数据吗
western用的什么二抗？
赞一下 回复此楼
10楼2012-04-06 16:08:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 anxiuhong 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +8 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 9/450 2026-11-13 11:11 by Equinoxhua
[考博] 27博士申请 +5 白白白ly 2026-11-09 5/250 2026-11-13 05:01 by wlf1982
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 4/200 2026-11-12 12:48 by ECLTXnJnRSXf
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 5/250 2026-11-12 12:28 by ECLTXnJnRSXf
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 4/200 2026-11-12 12:28 by ECLTXnJnRSXf
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 5/250 2026-11-12 11:25 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 4/200 2026-11-12 11:22 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:49 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 5/250 2026-11-12 10:38 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:27 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 7/350 2026-11-12 10:16 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 YHiw1gou1Eda 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:08 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 FChKX8meu1ds 2026-11-09 11/550 2026-11-12 09:57 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 8/400 2026-11-12 09:46 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +8 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 12/600 2026-11-12 09:32 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 6/300 2026-11-12 07:09 by 9fOTqj074tIg
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 5/250 2026-11-12 06:14 by 9fOTqj074tIg
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 4/200 2026-11-12 02:23 by 9fOTqj074tIg
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 7/350 2026-11-12 00:44 by 9fOTqj074tIg
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 17:03 by TgvkbZZl9tqB
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭