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anxiuhong

新虫 (初入文坛)

[求助] 抗体问题

大家好,最近找公司做了一个抗体,发现抗体显示的带不是我的目的条带,图片上面是SDS-PAGE染色的胶,下面是Westen的片子,点样顺序在图片下方,我的蛋白是拟南芥总蛋白,我的目的带是38kd。想问一下SDS中最亮的那条大约55kD的带是什么东西,并且western检测的条带也大约是55kd的,我觉得就是SDS上的那条最亮的带,请问是抗体不特异造成的吗?还是其他原因?谢谢!

上面:SDS-PAGE  下面:Western blot
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anxiuhong

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by qjy_134 at 2012-04-06 12:35:29:
你在SDS-PAGE 标记一下靶带的位置

我的图片Marker标记的大小没有完全显示,SDS-PAGE图片最右边是fermentas的彩虹marker,从上到下箭头所指为100,70,55,40kd,我的靶蛋白应该就在最下面那个箭头附近,最左边是easysee marker。western图片最右边是easysee  marker,箭头应该是40kd的位置,4和5之间的marker是fermentas的彩虹marker,我每次显影都只能显出100和70kd的带,比较上下两张图片我觉得显出来的带差不多是55的带
5楼2012-04-06 14:37:26
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qjy_134

铜虫 (小有名气)


你在SDS-PAGE 标记一下靶带的位置
2楼2012-04-06 12:35:29
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能是抗体重链吧..........
3楼2012-04-06 13:14:47
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qjy_134

铜虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
SDS上最亮的死55KD,不是你的靶带了? 这样的话你免疫的蛋白不纯,下面最粗的也是55KD位置蛋白。
4楼2012-04-06 13:32:06
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