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C-JingX

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质中内毒素的去除 已有2人参与

求助:想做一个致病菌分泌蛋白的功能,打算纯化出蛋白,将其与人细胞共孵育,检测细胞因子的变化,请问在与细胞相互作用前是不是应该先将纯化的蛋白中内毒素去除,如何去除呢?
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走自己的路,不要追逐别人的脚步!
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dasheng1980

铁杆木虫 (知名作家)

大圣

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.你的蛋白的分子量是多少,如果小的话可以用超滤;
2.你的蛋白的等电点是多少,确定后可用离子柱进行去除,但要是内毒的量大的话,可能要多重复几次。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

dasheng1980
2楼2012-03-27 10:47:46
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C-JingX

金虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by dasheng1980 at 2012-03-27 10:47:46:
1.你的蛋白的分子量是多少,如果小的话可以用超滤;
2.你的蛋白的等电点是多少,确定后可用离子柱进行去除,但要是内毒的量大的话,可能要多重复几次。

谢谢,我的蛋白是40kDa左右,等电点是5.19
走自己的路,不要追逐别人的脚步!
3楼2012-03-27 15:46:15
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
C-JingX: 金币+2, ★有帮助, 哦,这样啊,主要还是想自己做 2012-03-27 19:43:10
既然纯化,必须要不内毒素去除掉,自己不想摸索条件的话,可以让一些公司给你们做的。
4楼2012-03-27 19:18:55
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dasheng1980

铁杆木虫 (知名作家)

大圣

【答案】应助回帖

★ ★ ★
C-JingX: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢! 2012-03-27 19:42:16
40K的用超滤不行,太大了,用阴离子交换试一下吧。
dasheng1980
5楼2012-03-27 19:26:55
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chui2004

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
C-JingX: 金币+3, ★★★很有帮助, 哦,好的,我再查看一下,谢谢 2012-03-30 22:35:17
可以使用高效去内毒素填料去除最终纯化出来的蛋白质中的内毒素,其最终的内毒素含量能达到临床应用要求。
相信自己,一定能成功!
6楼2012-03-30 14:29:07
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海浪016

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by chui2004 at 2012-03-30 14:29:07
可以使用高效去内毒素填料去除最终纯化出来的蛋白质中的内毒素,其最终的内毒素含量能达到临床应用要求。

请问下:高效去内毒素填料有哪些?可以推荐个厂家或产品吗?
7楼2014-11-27 17:31:32
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wqai45

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我们的实验室在一般情况下都是在纯化的同时去除内毒素的,如果是带标签的话用亲和层析的方法去除,不带标签的可以用离子交换层析方法去除,除此之外还可以过分子筛特异性去除内毒素的PMB柱子,实在不行就去找公司去除内毒素。http://www.detaibio.com/endotoxin-control-removal-neidusu.html
8楼2015-02-25 10:01:59
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long0316

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

内毒素带强的负电荷,与蛋白质相比与阴离子柱结合能力更强,可以通过柱层析方法进行分离,如果样品不适合用柱层析方法,可以通过Triton X-114相分离方法进行分离
9楼2015-11-26 16:55:57
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小猪儿WWJ

新虫 (初入文坛)

您好!我现在也想做您当初类似的实验,也有如您当初同样的问题,不知您当初通过离子交换以及分子筛的方法是否达到实验目的,成功去除内毒素了呢?我的蛋白理论大小30KD,理论PI为6.2,不知通过类似的方法是否也可以去除?您的实验最后有测量内毒素含量吗?如果测了是怎么测的呢?谢谢!
10楼2016-02-18 21:16:26
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