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有诱导过EMT的经验人士吗？可否讨论一下 已有4人参与
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一直在建EMT model，已经三四个月了，几乎没有什么进展，尝试过几种不同类型的epithelial细胞系。最开始用的是HT29细胞，通过过表达snail诱导，real-time和western检测的结果都显示snail表达量非常高，但是很奇怪，细胞一直看不出明显的形变，检测E-cadherin的mRNA水平和蛋白水平都没有差异。 后来我们向weinberg实验室借了一株永生化的HMLE（immortalized human mammary epithelial cells）细胞系，这个属于正常细胞系，研究起来更容易。我们尝试用snail，twist以及tgfb三种方式诱导，从weinberg以前的paper来看，诱导一段时间后细胞会从紧密的上皮样变成松散，并且形状很长的细胞，但我们按照paper里面的方法诱导一段时间后（已经是第9天了），还是没有看到明显的形态变化。 weinberg的paper里面关于EMT诱导的细节其实写的并不是很清楚，所以我担心是不是忽视了一些很重要的细节问题。比如血清的问题，这株细胞培养时是不能加血清的，诱导EMT的过程没有血清会不会有影响？另外，感染完细胞以后能不能继续用上皮细胞的培养基培养，还是需要换成其他的培养基？ 恳请有EMT经验的同胞指点，不胜感激！ |
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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5楼2018-04-02 18:02:27
西瓜
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