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有诱导过EMT的经验人士吗?可否讨论一下 已有4人参与
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一直在建EMT model,已经三四个月了,几乎没有什么进展,尝试过几种不同类型的epithelial细胞系。最开始用的是HT29细胞,通过过表达snail诱导,real-time和western检测的结果都显示snail表达量非常高,但是很奇怪,细胞一直看不出明显的形变,检测E-cadherin的mRNA水平和蛋白水平都没有差异。 后来我们向weinberg实验室借了一株永生化的HMLE(immortalized human mammary epithelial cells)细胞系,这个属于正常细胞系,研究起来更容易。我们尝试用snail,twist以及tgfb三种方式诱导,从weinberg以前的paper来看,诱导一段时间后细胞会从紧密的上皮样变成松散,并且形状很长的细胞,但我们按照paper里面的方法诱导一段时间后(已经是第9天了),还是没有看到明显的形态变化。 weinberg的paper里面关于EMT诱导的细节其实写的并不是很清楚,所以我担心是不是忽视了一些很重要的细节问题。比如血清的问题,这株细胞培养时是不能加血清的,诱导EMT的过程没有血清会不会有影响?另外,感染完细胞以后能不能继续用上皮细胞的培养基培养,还是需要换成其他的培养基? 恳请有EMT经验的同胞指点,不胜感激! |
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西瓜
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