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铁虫 (初入文坛)

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[求助] 豆类粗蛋白的提取方法

豆类（如大豆、云豆、绿豆、蚕豆、鹰嘴豆等）粗蛋白的提取方法有哪些？各种方法的优缺点？

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我就是我，是颜色不一样的烟火。

1楼2012-03-22 11:35:15

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lijunqing525

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【答案】应助回帖

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sweety: 回帖置顶 2012-03-22 13:42:38

7.1.1 试样的消煮
   称取试样0.5g ~ 1g（含氮量5 ~ 80mg）准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶（5.6）中，加入6.4g混合催化剂（4.2），与试样混合均匀，再加入12mL硫酸（4.1）和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉（5.4）上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360 ~ 410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。
7.1.2 氨的蒸馏（蒸馏步骤的检验见附录A）
7.1.2.1 常量蒸馏法
   将试样消煮液（7.1.1）冷却，加入60~100mL蒸馏水，摇匀，冷却。将蒸馏装置（5.7）的冷凝管末端浸入装有25mL硼酸（4.8）吸收液和2滴混合指示剂（4.5）的锥形瓶内。然后小心向凯氏烧瓶中加入50mL氢氧化钠溶液（4.3），轻轻摇动凯氏烧瓶，使溶液混匀后再加热蒸馏，直至流出液体积为100mL。降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏1~2min，并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。
7.1.2.2 半微量蒸馏法
   将试样消煮液冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10~20mL注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。
   注：7.1.2.1和 7.1.2.2蒸馏法测定结果相近，可任先一种。
7.1.2.3 蒸馏步骤的检验
   精确称取0.2g硫酸铵（4.6），代替试样，按7.1.2和 7.2.2步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量为21.19±0.2%，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。
7.1.3 滴定
   用7.1.2.1和 7.1.2.2法蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L（4.6.1）或0.02mol/L（4.6.2）硫酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。
7.2  推荐法
7.2.1 试样的消煮
   称取试样0.5g ~ 1g（含氮量5 ~ 80mg）准确至0.0002g，放入消化管中，加入2片消化片（仪器自备）或6.4g混合催化剂（4.2），12mL硫酸（4.1），于420℃下在消煮炉上消化1.5h。取下放凉。
7.2.2 氨的蒸馏
      采用全自动定氮仪（5.11）时，按仪器本身常量程序进行测定。
7.2.3 滴定
   用0.1mol/L的标准硫酸溶液滴定吸收液，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。
8  空白测定
称取蔗糖0.5g代替试样，按第七章进行空白测定，消耗0.1mol/L硫酸标准溶液的体积不得超过0.2mL。消耗0.2mol/L硫酸标准溶液的体积不得超过0.3mL。
9　分析结果的表述
9.1　计算见下式：
(V2-V1)×C×0.014×6.25
粗蛋白质（%）=　–––––––––––––––––––––––––––––––× 100
                                          V/
m × ––––
                                          V
式中：V2── 滴定试样时所需标准溶液体积，mL；
V1── 滴定空白时所需标准溶液体积，mL；
C── 硫酸标准溶液浓度，mol/L；
m── 试样质量，g；
V── 试样分解液总体积，mL；
V/── 试样分解液蒸馏用体积，mL；
0.0140── 每毫克当量氮的克数；
6.25── 氮换算成蛋白质的平均数。