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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 纯化出的蛋白没有活性，求教！
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kedaxiaoyu

木虫 (职业作家)

神虫浮云

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
纯化中的Buffer有没有使其变性的因素，如PH。
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11楼2012-03-23 16:28:56
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imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zoeye: 金币+2, ★★★很有帮助, 请问您有用过4B的柱子吗 柱子纯完了直接用PBS洗洗放20%乙醇就可以嘛？ 还是每次都要重生，保存？ 有人说4B的柱子能用好久，好久才需要重生一次呢 2012-03-23 23:12:56
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 高人！ 2012-03-25 14:13:42
楼上诸位说的都有一定道理
首先：超声对酶的活性是有影响的，磷酸酶的化学本质是蛋白质，超声破碎菌体时会大量产热，高温就会使酶失活，所以一般超声都需要冰浴；此外，也有些人认为超声功率过大会导致部分肽键断裂，不过没有被证实；总之，超声的条件是很重要的。
其次：纯化时应注意选用低盐浓度洗脱得到的蛋白，浓度越高对酶的影响越大，一般纯化之后的酶都要经过脱盐或是透析来除盐。
再次：你的蛋白虽然纯化出来了，但是并不代表就一定正确折叠了，可能会像包涵体一样不具有活性，这样你就要考虑是否进行变复性了，不过一般来说变复性得到的酶活性都比较差。
最后：你在测酶活时的条件很重要，最好严格控制，先按照文献提供的条件试试，好文章里的试验结果重复性都是很好的，只要你按照他说的做就是了。
     最好万事靠自己，别人摸索的条件没发文章前不要去问，免得别人为难，自己尴尬……
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悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便
12楼2012-03-23 23:07:05
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imyting

至尊木虫 (正式写手)
我是用多次才再生一次的，总是再生对柱子也不好啊
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悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便
13楼2012-03-23 23:21:59
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xiejinhui

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by imyting at 2012-03-23 23:21:59:
我是用多次才再生一次的，总是再生对柱子也不好啊

楼主啊，看到你真好，我做的抗体柱就是没做几次就失去了一部分活性，正在纳闷是怎么回事呢。问下：你每次做完后不再生柱子对下次纯化的影响大吗？？？
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14楼2012-04-10 15:32:22
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xiejinhui

金虫 (小有名气)
囊个没得热人回了呢？？？难道很少人做这个东西啊。
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15楼2012-04-17 15:30:26
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