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kedaxiaoyu

木虫 (职业作家)

神虫浮云

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
纯化中的Buffer有没有使其变性的因素,如PH。
11楼2012-03-23 16:28:56
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imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zoeye: 金币+2, ★★★很有帮助, 请问您有用过4B的柱子吗 柱子纯完了直接用PBS洗洗放20%乙醇就可以嘛? 还是每次都要重生,保存? 有人说4B的柱子能用好久,好久才需要重生一次呢 2012-03-23 23:12:56
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 高人! 2012-03-25 14:13:42
楼上诸位说的都有一定道理
首先:超声对酶的活性是有影响的,磷酸酶的化学本质是蛋白质,超声破碎菌体时会大量产热,高温就会使酶失活,所以一般超声都需要冰浴;此外,也有些人认为超声功率过大会导致部分肽键断裂,不过没有被证实;总之,超声的条件是很重要的。
其次:纯化时应注意选用低盐浓度洗脱得到的蛋白,浓度越高对酶的影响越大,一般纯化之后的酶都要经过脱盐或是透析来除盐。
再次:你的蛋白虽然纯化出来了,但是并不代表就一定正确折叠了,可能会像包涵体一样不具有活性,这样你就要考虑是否进行变复性了,不过一般来说变复性得到的酶活性都比较差。
最后:你在测酶活时的条件很重要,最好严格控制,先按照文献提供的条件试试,好文章里的试验结果重复性都是很好的,只要你按照他说的做就是了。
     最好万事靠自己,别人摸索的条件没发文章前不要去问,免得别人为难,自己尴尬……
悠哉游哉做实验,成兮败兮我随便
12楼2012-03-23 23:07:05
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imyting

至尊木虫 (正式写手)

我是用多次才再生一次的,总是再生对柱子也不好啊
悠哉游哉做实验,成兮败兮我随便
13楼2012-03-23 23:21:59
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xiejinhui

金虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by imyting at 2012-03-23 23:21:59:
我是用多次才再生一次的,总是再生对柱子也不好啊

楼主啊,看到你真好,我做的抗体柱就是没做几次就失去了一部分活性,正在纳闷是怎么回事呢。问下:你每次做完后不再生柱子对下次纯化的影响大吗???
14楼2012-04-10 15:32:22
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xiejinhui

金虫 (小有名气)

囊个没得热人回了呢???难道很少人做这个东西啊。
15楼2012-04-17 15:30:26
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