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kedaxiaoyu

木虫 (职业作家)

神虫浮云

应助: 84 (初中生)
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专业: 微生物生理与生物化学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

纯化中的Buffer有没有使其变性的因素，如PH。

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11楼2012-03-23 16:28:56

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imyting

至尊木虫 (正式写手)

MolEPI: 6
应助: 66 (初中生)
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帖子: 805
在线: 167.6小时
虫号: 736362
注册: 2009-03-31
性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zoeye: 金币+2, ★★★很有帮助, 请问您有用过4B的柱子吗柱子纯完了直接用PBS洗洗放20%乙醇就可以嘛？还是每次都要重生，保存？有人说4B的柱子能用好久，好久才需要重生一次呢 2012-03-23 23:12:56
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 高人！ 2012-03-25 14:13:42

楼上诸位说的都有一定道理
首先：超声对酶的活性是有影响的，磷酸酶的化学本质是蛋白质，超声破碎菌体时会大量产热，高温就会使酶失活，所以一般超声都需要冰浴；此外，也有些人认为超声功率过大会导致部分肽键断裂，不过没有被证实；总之，超声的条件是很重要的。
其次：纯化时应注意选用低盐浓度洗脱得到的蛋白，浓度越高对酶的影响越大，一般纯化之后的酶都要经过脱盐或是透析来除盐。
再次：你的蛋白虽然纯化出来了，但是并不代表就一定正确折叠了，可能会像包涵体一样不具有活性，这样你就要考虑是否进行变复性了，不过一般来说变复性得到的酶活性都比较差。
最后：你在测酶活时的条件很重要，最好严格控制，先按照文献提供的条件试试，好文章里的试验结果重复性都是很好的，只要你按照他说的做就是了。
最好万事靠自己，别人摸索的条件没发文章前不要去问，免得别人为难，自己尴尬……

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悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便