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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于毕赤酵母表达
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简0516单

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 关于毕赤酵母表达

各位老师，请教一下，在做毕赤酵母表达时，转到比赤酵母里之后，做PCR鉴定时，能不能直接做菌落PCR?酵母菌的壁又特别厚，该怎么处理呢？
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1楼 2012-03-19 18:53:53
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王雨云

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
简0516单: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2012-04-15 17:21:08
引用回帖:
9楼: Originally posted by 简0516单 at 2012-03-20 12:48:39:
可是我现在在筛选，量很大的，如果都提质粒工作量忒大了

应该是-80度冻融哈，开始说拐了。大量筛选确实这个方法工作量由点大，那就-80度反复冻融，同时还加点溶菌酶吧，不过一般说溶菌酶好像是针对细菌细胞壁的，真菌细胞壁较厚，一般溶菌酶还不容易起作用
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11楼2012-03-20 13:13:15
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
简0516单: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 谢谢帮助 2012-04-07 00:09:56
100°水浴5-10min 再立即放入-80冰箱 反复三次后  再用溶菌酶（最好用lyticase)处理  可以菌落PCR 不用酶处理也可能P出来
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简0516单
仕不可不弘毅，任重而道远
2楼2012-03-20 08:51:03
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
简0516单: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢帮助 2012-04-07 00:10:14
可以直接做菌落PCR的，不用前期处理也是可以P出来的，你只需要在设定PCR反应条件时95度维持时间稍微长一点就可以了
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简0516单
3楼2012-03-20 09:48:52
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简0516单

至尊木虫 (著名写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by whb21 at 2012-03-20 09:48:52:
可以直接做菌落PCR的，不用前期处理也是可以P出来的，你只需要在设定PCR反应条件时95度维持时间稍微长一点就可以了

非常感谢您的帮助，请问95℃大概维持多长时间呢？我现在用的是10min，没有P出来
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4楼2012-03-20 11:12:03
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