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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 过表达
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bbwalkman

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

那两者做的时候表达量上有没有区别
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11楼2012-03-22 15:00:32
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司马诸葛

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by stfoxst at 2012-03-22 11:23:45:
楼主在实验设计之初可能没有考虑到后续的问题。应该找你导师去，这是他的失职
如果有时间的话，建议补充一部分实验。比如构建p-A基因-IRES-EGFP载体，转染细胞，筛选阳性细胞株后继续后续实验。
如果快毕业了 ...

终于有人和我想的一样了。我考虑了一下，觉得realtimePCR可以解决这个问题。但是不知道这个证据严密不严密，能不能说明问题？
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12楼2012-03-22 19:53:35
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stfoxst

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by 司马诸葛 at 2012-03-22 19:53:35:
终于有人和我想的一样了。我考虑了一下，觉得realtimePCR可以解决这个问题。但是不知道这个证据严密不严密，能不能说明问题？

证据严密与否要看你的实验目的，如果仅止是过表达A基因的话，那应该够了。
Western blot可以在蛋白水平定量，用ImageJ计算A蛋白和内参蛋白比值，就可以相对定量蛋白的表达水平。
如果非要特别准确的话，可能要用到一些专门的蛋白定量方法吧，这个实在是不懂，只用过bradford，不知道别的虫子有没有了解这方面的。
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AndGodsaid,Lettherebelight:andtherewaslight.
13楼2012-03-23 16:00:29
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以用荧光定量PCR的方法，引物设计在两个基因同源的部分，比较含有外源基因的样品以及对照样品的相对表达量就可以了。
比如说对照样品的表达量为1，含有外源基因的样品的表达量为5，那么5-1=4就是外源基因的相对表达量啦。
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14楼2012-03-23 17:53:46
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