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bbwalkman

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

那两者做的时候表达量上有没有区别
11楼2012-03-22 15:00:32
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司马诸葛

木虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by stfoxst at 2012-03-22 11:23:45:
楼主在实验设计之初可能没有考虑到后续的问题。应该找你导师去,这是他的失职
如果有时间的话,建议补充一部分实验。比如构建p-A基因-IRES-EGFP载体,转染细胞,筛选阳性细胞株后继续后续实验。
如果快毕业了 ...

终于有人和我想的一样了。我考虑了一下,觉得realtimePCR可以解决这个问题。但是不知道这个证据严密不严密,能不能说明问题?
12楼2012-03-22 19:53:35
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stfoxst

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by 司马诸葛 at 2012-03-22 19:53:35:
终于有人和我想的一样了。我考虑了一下,觉得realtimePCR可以解决这个问题。但是不知道这个证据严密不严密,能不能说明问题?

证据严密与否要看你的实验目的,如果仅止是过表达A基因的话,那应该够了。
Western blot可以在蛋白水平定量,用ImageJ计算A蛋白和内参蛋白比值,就可以相对定量蛋白的表达水平。
如果非要特别准确的话,可能要用到一些专门的蛋白定量方法吧,这个实在是不懂,只用过bradford,不知道别的虫子有没有了解这方面的。
AndGodsaid,Lettherebelight:andtherewaslight.
13楼2012-03-23 16:00:29
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以用荧光定量PCR的方法,引物设计在两个基因同源的部分,比较含有外源基因的样品以及对照样品的相对表达量就可以了。
比如说对照样品的表达量为1,含有外源基因的样品的表达量为5,那么5-1=4就是外源基因的相对表达量啦。
14楼2012-03-23 17:53:46
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