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司马诸葛

木虫 (正式写手)

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[求助] 过表达

请问：过表达的外源基因A与内源基因A同源性高达90%，如何确定外源基因A已经表达呢？RT-PCR没法设计特异性引物，WB抗体也没有特异性。。。。愁！

[ Last edited by 司马诸葛 on 2012-3-16 at 15:27 ]

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1楼 2012-03-16 09:32:57

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stfoxst

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

引用回帖:

12楼: Originally posted by 司马诸葛 at 2012-03-22 19:53:35:
终于有人和我想的一样了。我考虑了一下，觉得realtimePCR可以解决这个问题。但是不知道这个证据严密不严密，能不能说明问题？

证据严密与否要看你的实验目的，如果仅止是过表达A基因的话，那应该够了。
Western blot可以在蛋白水平定量，用ImageJ计算A蛋白和内参蛋白比值，就可以相对定量蛋白的表达水平。
如果非要特别准确的话，可能要用到一些专门的蛋白定量方法吧，这个实在是不懂，只用过bradford，不知道别的虫子有没有了解这方面的。