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落叶沙沙

金虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 1393160
注册: 2011-09-07
专业: 色谱分析

[求助] 反相C18柱分离多巴胺，柱子用一段时间后出现分离峰，怎么解决

我用的安捷伦反相C18的柱子，250mm，分离多巴胺，流动相是水相：有机相=7:3，水相为NaH2PO4 50mmol/L, EDTA 250mg/L, 十二烷基硫酸钠 500mg/L; 有机相为乙腈 200ml/L, 甲醇 100ml/L. 磷酸调pH2.9, 流速1.0ml/min. 柱子是旧柱子，前几次用是好好的，所有的峰型都很好，但是用一段时间后出现分裂峰，双峰，同时检测两个物质，都出现了双峰。刚开始以为是柱子没有接好，造成了死体积，但是把柱子反复接了好几次，还是出现肩峰，分裂峰，只是峰型有了一点变化，这该怎么解决呢，求高人指点!!!

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1楼2012-03-15 21:49:39

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永恒国度

金虫 (小有名气)

应助: 14 (小学生)
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专业: 色谱分析

引用回帖:

11楼: Originally posted by zulovexin at 2012-03-17 22:18:59:
本人不建议您反冲柱子，而且进口的柱子最好不要拆卸，如果柱效不行了，基本没有修复的必要了！！您的缓冲盐可是没少加啊！！用完一定要冲洗柱子！！！已经累流动相尽量现用现配，缓冲盐也是，流动相配好了记着一 ...

这位虫友说的还有点道理，从你的谱图上看，柱效并没有很差，虽然出现了裂峰，但单个色谱峰的峰形还是可以的。我也觉得是跟你的缓冲液体系有关系，特别是离子对试剂（十二烷基磺酸钠）的使用，对柱子的表面化学会产生较大的影响，常常很难把柱子平衡回来，分离的重复性变差。