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thanku0967

金虫 (初入文坛)

[求助] cck8测细胞增殖是标准曲线是怎么绘制的?

cck8测细胞增殖的标准曲线是怎么绘制的?是用已知的不同细胞数测相应的OD值然后绘制标准曲线?如果是这样小弟有个疑问,为何不直接数细胞数来绘制生长曲线?
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thanku0967

金虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by freshblack at 2012-03-20 16:06:31:
用cck-8没做过标曲,就直接和control组比的。。。
但是我感觉应该是用计数板计数后用CCK8反应做出标曲来,比如做10的3次方,10的4次方,10的5次方。。。到10的10次方~然后以细胞数为横坐标,相应的OD为纵坐标,可 ...

您能把标曲说的详细些吗 我不是很明白
10的3次方 10的4次方。。。这方法我也想过 不过我接种在六孔板10的3次方 两星期后技术 应该细胞数目不会变化太大 所以这个方法可能误差会很大 不知道您有没有好的点子 谢谢
3楼2012-03-20 22:51:29
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freshblack

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
thanku0967: 金币+10, 有帮助 2012-03-20 22:53:02
用cck-8没做过标曲,就直接和control组比的。。。
但是我感觉应该是用计数板计数后用CCK8反应做出标曲来,比如做10的3次方,10的4次方,10的5次方。。。到10的10次方~然后以细胞数为横坐标,相应的OD为纵坐标,可以拟合出一条直线来。这样,你后面实验时测定的OD值就可以直接在直线上找到。
如果用数细胞来绘制生长曲线工作量太大,也不准。不如用标曲的方便。但是用标曲的话,每次实验时都要重新绘制,因为细胞状态啊之类的每次独立实验之间会有不一样。

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勤有功,戏无益,满招损,谦得益
2楼2012-03-20 16:06:31
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freshblack

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
thanku0967: 金币+5, 有帮助 2012-03-22 23:47:26
你要做药物刺激两个周?这么久?
那我感觉有两个方法:
1,你种板的时候按十倍梯度稀释,不要计数,在做标曲的那天再进行计数。
2,你做标曲的细胞,在你测受试板OD的前一天再种板,第二天计数并作标曲。
第一个方法可能比较准些,毕竟是相同的细胞一次处理。
第二个方法不是同一批次处理的细胞,但是计数上可能准点。

这也是我自己的想法,没有运用到实践中。你要做实验的话可能要多做几次摸摸条件,比如按方法一种板的话,初始细胞的浓度就很重要啦,自己要摸索一下~
勤有功,戏无益,满招损,谦得益
4楼2012-03-21 19:23:07
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freshblack

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
thanku0967: 金币+5 2012-03-22 23:47:37
方法1再说详细一些,因为我个人感觉这个比较准。
就比如10的3次方你计数好了,然后10倍10倍稀释,最后稀释到10的10次方,或者更稀一些。再或者以后经验比较丰富了,可以直接10倍稀释种稀一点。
然后你在测OD前再对它们计个数,再做标曲。

总而言之,方法得靠自己摸索,别人讲的也就是个概念~祝好运啦~~
勤有功,戏无益,满招损,谦得益
5楼2012-03-21 19:27:53
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