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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 阳性克隆的扩大培养长不出菌
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hongdou83917065

铁虫 (初入文坛)

[交流] 阳性克隆的扩大培养长不出菌 已有2人参与

挑取单克隆，对经过菌落pcr筛选阳性的克隆摇菌扩大培养，可是摇了20h菌液还是澄清的。
载体PET32
插入片段2000bp
感受态 DH5α
培养温度37度180转
培养基，平板均没有问题
做了几次都这样快疯了，帮帮忙吧！
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酶切专家

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耶和华是我的牧者
1楼 2012-03-13 19:57:21
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酶切专家

金虫 (小有名气)
★ ★
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西瓜(金币+1): 鼓励下 2012-03-13 23:55:38
可能是你克隆的基因（或者表达产物）对E.coli有很强的毒性，事实上，这种情况很常见。我建议你在培养基中加葡萄糖至终浓度5%，应该能解决你的问题。
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2楼2012-03-13 20:17:56
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karin

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖
考虑重新做一次转化吧。我以前也遇到过这种情况，很急人，各种培养条件换了又换，就是不行，不清楚什么原因。后来重新做了一次转化、筛选，就顺利了。祝好运！
赞一下(1人) 回复此楼
坚持就是胜利
3楼2012-03-14 09:34:57
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