3楼: Originally posted by whb21 at 2012-03-01 09:53:10:
建议你做些对照试验，诱导后菌液离心上清和沉淀分别跑一下胶，看看是否蛋白全在沉淀中，如果那样的话就比较麻烦，还得进行包涵体变性复性...

楼: Originally posted by whb21 at 2012-03-02 10:01:20:
工程菌表达外源蛋白是很容易形成包涵体的，由于强启动子表达外源蛋白的速度太快了，使得蛋白不能很好的折叠导致包涵体的形成。我以前做蛋白改造也出现这问题，很不好弄，你可以试试降低诱导温度，祝好运！

楼: Originally posted by 若水5886 at 2012-03-02 09:28:21:
给你想个找出问题的办法：
诱导后的菌液分成下面几份上样跑胶：第1份 直接离心取培养基上清 第2份 取超声破碎的沉淀 第3份 取超声破碎的上清  

都上样看看哪些里面有目的蛋白，看看是你的蛋白形成包涵体了还是 ...

13楼: Originally posted by ss000qq at 2012-03-04 20:11:43:
谢谢，不过我的表达量很低呢，条带不是很明显，包涵体是不是应该不会形成啊？不是说表达量过高过快才容易形成包涵体的嘛？我还没有做诱导条件的优化，现在只是诱导温度28℃，IPTG终浓度0.6mM/L。你说的那三步我今 ...

15楼: Originally posted by AnaSequence at 2012-04-01 08:26:32:
你把破胞离心得到的沉淀按照包涵体的处理方式处理了，再跑SDS-PAGE看，就知道表达是高还是低了，形成包涵体后，所表达的蛋白基本都在包涵体了，你还没把包涵体怎么样，只看上情，当然看不到高表达的蛋白条带了。